Практичне заняття № 2
ТЕМА:Засвоєння методів лабораторного дослідження протозойних хвороб.
МЕТА:Вивчити методики лабораторних досліджень протозойних хвороб.
ЗНАТИ:Морфологію простіших.
УМІТИ:1.Готувати нативні мазки і мазки з розчином Люголя;
Культивувати паразитів на живильних середовищах.
Освоїти метод мазка і товстої крапі крові.
ЛІТЕРАТУРА:Д.Є.Геніс "Медицинскаяпаразитология", М, Медицина, 1991,
с., 261-264.
Дикий І.Л.«Медична та ветеринарна паразитологія. Керівництво для практичних занять» Х., Золоті сторінки,2003р. с. 5 – 19.
ПЛАН
Метод фарбування залізним гематоксиліном.
Метод виготовлення нативних мазків фекалій та інших матеріалів.
Ознайомлення з методом забарвлення мазків розчином Люголя.
Ознайомлення з методом формалін-ефірного збагачення.
Метод Тельмана.
6. Метод мазка і товстої краплі крові.
7. Метод культивування паразитів на поживних середовищах.
8. Нативний мазок шкірного інфільтрату та лімфатичних вузлів.
9. Пунктат кісткового мозку.
10. Провести мікроскопію готових препаратів і виписати результати досліджень.
ОСНАЩЕННЯ.1. Обладнане робоче місце лаборанта.
2. Мікропрепарати протозойних організмів.
3. Мікроскопи.
4. Таблиці та мікроплакати паразитичних найпростіших.
Завдання для самостійної підготовки до практичного заняття.
За допомогою підручників, конспекту лекцій і додаткової літератури засвоїти теоретичний матеріал за запропонованими нижче питаннями.
Пояснити тип найпростіших. Дати характеристику тип найпростіших
Назвати представників типу найпростіших.
Назвіть хвороби, які викликають:
- дизентерійна амеба;лейшманії;лямблія;малярійні плазмодії;
- трихомонади;трипаносоми.
Будова і розвиток найпростіших:
- цикл розвитку дизентерійної амеби.
Методи профілактики протозойних хвороб.
6. Правила обробки та знезараження лабораторного матеріалу, лабораторного обладнання та посуду.
7.Правила особистої гігієни лаборанта.
8.Вимоги до взяття і транспортування матеріалу.
Хід заняття.
1. Метод фарбування залізним гематоксиліном.
Сухий гематоксилін – це дрібні жовтуваті кристали. Розводять в 96% етанолу: на 1гр. гематоксиліну – 10мл спирту. Цей 10%розчин готують за кілька тижнів до початку роботи. З утриманого 10% спиртового розчину готують 1% водний розчин. Для цього 10мл спиртового розчину змішують з 90мл води. «Дозріває» водний розчин при кімнатній температурі 14 днів, або в термостаті – 2дні.Розчин придатний для фарбування, якщо при додаванні 2 -3 крапель його до водогінної води одразу з’являється фіолетовий колір (Якщо коричневий колір – не придатна).
Препарат ополіскують у дистильованій воді після протравлювання і переносять для забарвлення у 1% (0,5%) розчинугематоксиліну на 2 хвилини та промивають водою.
2. Метод виготовлення нативних мазків фекалій
Для виготовлення нативних мазків фекалій студент використовує предметні і накривні скельця, дерев'яні палички, піпетки, ізотонічний розчин хлориду натрію, ємкість з 3% розчином хлораміну або 5% розчин карболової кислоти,мікроскоп.
На предметні скельця нанести піпеткою 1-2 краплі ізотонічного розчину у 2 місцях з проміжком 4 см. Кінцем дерев'яної палички з проби фекалії взяти невеликий шматок і перенести в краплю, розтираючи до отримання рівномірної емульсії. Другу порцію фекалії внести в другу краплю. Отримані препарати покривають покривним скельцем і мікроскопують.
Якщо в щілині між скельцями виступила крапля досліду і попала на його поверхню, препарат бракують (в дезрозчин) і виготовляють новий.
Виконайте завдання 1.За допомогою підручників заповни таблицю.
Диференціальні ознаки форм амеби дизентерійної
ознаки |
Дизентерійна амеба (E. histolytica) |
|
Велика вегетативна форма |
Просвітня форма |
|
Розміри, мкм |
|
|
Цитоплазма
|
|
|
Включення в цитоплазмі |
|
|
Ядро (видимість) |
|
|
Рух
|
|
|
Псевдоподії (описати)
|
|
|
Цисти |
|
|
Виконайте завдання 2.
Мазок дизентерійної амеби а) зафарбований залізним гематоксиліном.
Позначте: 1.ядро з ядерцем; 2.чорні диски еритроцитів на різній стадії перетравлювання;
3. ектоплазму;
4. ендоплазму.
Нативний мазок б) дизентерійної амеби.
Позначте:
1.велику вегетативну форму ;
2.ектоплазму;
3.ендоплазму;
4. еритроцити.
3. Ознайомлення з методом забарвлення мазків розчином Люголя та в консерванті Сафаралієва.
Виконайте завдання 3.
Заповни порівняльну таблицю форм існування дизентерійної амеби.
-
Дизентерійна
амеба
Форма існування
Обробка
Кількість ядер
1
2,3,4
5
6.7
8
9
10 - 13
Метод забарвлення розчином Люголю: на предметне скельце нанести 1-2 краплі ізотонічного розчину в 2 місцях. Дерев'яною паличкою розтерти проби фекалії в краплях до рівномірної емульсії. В кожний препарат нанести краплю розчину Люголю. Покрити покривним скельцем і промікроскопувати при середньому збільшенні. По закінченню роботи предметні скельця з мазками розмістити в посуді з дезінфекційним розчином.
Якщо в щілині між скельцями виступила крапля досліду і попала на його поверхню, препарат бракують (в дезрозчин) і готовлять новий.
Розчин Люголю: йодид калію -3гр; кристалічного йоду – 1,5гр; дистильованої води – 100 мл. Спочатку розчинюють йодид калію, а потім – йод.
Консервант Сафаралієва:
- сульфат цинку – 1,65гр;
- формалін концентрований – 10мл;
- фенол кристалічний – 2,5гр;
- оцтова кислота концентрована – 5мл;
- метиленовий синій – 0,2 гр;
- вода дистильована – 100мл.