Робота № 11 Біохімічні дослідження чистої культури збудника

Одною з обов’язкових стадій бактеріологічної діагностики є вивчення харчових потреб збудника хвороби (біохімічні дослідження). Такі дослідження найчастіше проводять в декількох напрямках і вивчають здатність мікроорганізма до перетравлення:

• вуглеводів (моносахариди та їх похідні, дисахариди) – цукролітичні властивості;

• білків м’ясо-пептонного бульону та молока, олігопептидів желатини та окремих амінокислот (сірковмісних та триптофану) – протеолітичні властивості;

• ферментів патогенності (каталаза, ДНК-аза, коагулаза );

• окремих речовин шляхом постановки спеціальних реакцій (перетравлення жовчі, САМП- проба , реакція Фогес-Проскауера та ін.)

Табл. 17 Методики біохімічних досліджень

Особливості методики дослідження	Вид дослідження
	Розщеплення вуглеводів	Розщеплення білків, пептидів, амінокислот		Виділення ферментів патогенності	Спеціальні реакції
1	2	3		4	5
Речовина, яку вживає м/о	Моносах.: глюко-за, арабіноза, мальтоза, рамноза Дисахариди: лактоза, сахароза. Похідні моноса- хар.: сорбіт, манніт та ін.	Білки: молоко. Пептиди, амінокислоти: желатина, МПБ.		Солі ДНК в поживному середовищі, речовини плазми крові та ін.	Різні речовини, вживання яких є особливістю виду, що дослід жується.
Тип поживних середовищ	Напіврідкі диференційно-діагностичні	Рідке або напіврідке загального призначення		Різні типи середовищ	Різні типи середовищ
Метод внесення м/о	Уколом	Глибинний		Глибинний, крапельний (на скло)	Поверхневий або глибинний
1	2			3	4
Результати висіву	Після інкубаціі в термостаті, через 3-7 діб		В багатьох методиках – через декілька хв, при глибинному –через 2-3 доби.	Після інкубаціі в термостаті, через декілька діб (від 2 до 5-7).	Специфічні зміни в твердих та рідких середовищах
Ознаки при позитивно-му результаті реакції	Зміна кольору середовища у верхньому шарі, по всьому об’єму, по уколу.		Розрідження желатини, зсідання молока, зміна кольору індикаторів при виділенні NH3, H2S, індолу.	Зміни в середовищі навкруги колоній, випадіння осаду та виділення газу в суспензії на предметному склі.

При проведенні біохімічних досліджень для виявлення цукролітичних та протеолітичних властивостей мікробів користуються пробірками*. Для цього в напіврідкі середовища в пробірках виконують висіви уколом (бактеріологічна голка), висіви в бульйон роблять піпетками або петлями.

Висів уколом*. Мікробний матеріал з колонії беруть бактеріологічною голкою, прожареною та охолодженою в агарі. Висів виконують уколом голки в глибину поживного середовища по центру пробірки.

*Примітка. Пробірку з напіврідким живильним середовищем тримають майже горизонтально, а пробірку з желатиною – вертикально вверх дном. Завдяки цьому середовище не забруднюється мікроорганізмами з повітря.

Виявлення ферментів патогенності або здатність мікробів до здійснення спеціальних реакцій виконують за певними методиками. Користуються предметними скельцями, пробірками, чашками Петрі, бактеріологічними петлями та голками, піпетками.

Висів в бульйон та молоко. Прожареною та охолодженолю в агарі бактеріологічною петлею беруть мікробний матеріал. Вносять його в пробірку з рідким середовищем, легко струшують у верхньому мениску рідини. Петлю виймають та фламбірують, пробірку закривають і поміщають у термостат.