Робота №8 характеристика МетодІв стерилізації .

назва методу

Пастеризація

Кип’ятіння

Тиндалізація

Автоклавування

Сухий жар

Фламбування

температура

60-85 ^оС

100^оС

100^оС

108-145^оС

165-180^оС

300-400^оС

ЧАС ОБРОБКИ

15-20 хв

15-60 хв

3 рази по 20 хв з перервами 9-10 год

15 хв – 2 год

1,5 год – 30 хв

1-2 хв

призначення

обробка харчових продуктів

обробка харчових продуктів, не бацилярного патматеріалу

стерилізація харчових продуктів, порживних середовищ

стерилізація посуду, поживних середовищ, відпрацьованих матеріалів, спецодягу, лабораторного обладнання

стерилізація посуду

стерилізація мікробіологічних голок, петель, скляних шпателів, металевого інструментарію

прилад

водяна баня, плитка

автоклав

сушильна шафа

пальник

групи знищених мікроорганізмів

окремі види неспороутворюючих бактерій,

гіфи грибів та актиноміцетів

неспороутворюючі бактерії,

гіфи та спори грибів та актиноміцетів, дріжджі

всі

мікроорганізми

всі

мікроорганізми

всі мікроорганізми

всі мікроорганізми

ВИЖИВАЮТЬ

пігментовані дріжджі, спори грибів та актиноміцетів, бацили

бацили

гинуть всі мікроорганізми

фактор середовища

висока температура

вид впливу

обробка матеріалу для зменшення к-ті мікробів

стерилізація

Дія на речовини мікробів

денатурація білків та РНК, «розплавлення» та денатурація ДНК

Денатурація білків та РНК, «розплавлення» та денатурація ДНК

Денатурація білків та РНК, «розплавлення» та денатурація ДНК, руйнація ендоспор бацил в стадії проростання

Денатурація білків та РНК, «розплавлення» та денатурація ДНК, руйнація оболонок ендоспор бацилл

Денатурація білків та РНК, «розплавлення» та денатурація ДНК, руйнація оболонок ендоспор бацил

Обвуглення всіх речовин мікроорганізму

Змішана культура

Будь-яка проба мікробного матеріалу, відібрана в природних умовах (зразки грунту, повітря, стоків, води, патматеріал).

Накопичувальна культура

Головний етап процесу отримання чистої культури

Виділення із змішаної культура видів, здатних рости в особливих умовах

Чиста культура

Заключний етап процесу. Після його проведення можна дослідити біохімічні, антигенні та патологічні властивості збудника

На свіже поживне середовище (найчастіше МПА або МПБ) переносять матеріал тільки з колоній із специфічними ознаками.

Назва методу

Вмкористаний фактор

Дія на змішану культуру

Приклад

1

2

3

4

Біо-фізичний

Низька температура

Затримує ріст всіх мікробів, які не належать до психрофілів. Чашки з поживним середовищем витримують при 4-5^оС. Висів психрофілів здійснюють через 7-15 діб.

Збудники лістеріозу здатні при 5^оС виходити в поживний бульйон з тканин, розмножуватись в ньому. Патологічний матеріал в бульйоні зберігається в холодильнику 3 місяці (посіви – через тиждень)

Висока температура.

Існує декілька варіантів

• При інкубації засіяних чашок в термостаті (55-70^оС) з’являються колонії тільки термофільних мікробів .

• Виділення молочнокислих термофілів та інших видів термофільних бактерій

• При пастеризації (60-65 ^оС) рідкого матеріалу, в зразках виживають тільки термостійки мікроби

• Пастеризація, охолодження, висів на агарове середовище, вирощування при 32-35 ^оС при виділенні мікробів із зразків молока, вина, пива.

• При нагріванні нативного зразка або розведенного (вода, бульйон) до температури 80-100 ^оС виживають тільки мезофільні (80^оС) або термофільні (100^оС) бацили.

• Обробка матеріалів (грунт, вода, патматеріал), в яких є представники спороутворюючих бактерій родів Bacillus, Clostridium та ін.

Біохімічний метод

Створення кислого або лужного рН середовища

Використовують розчииу NаОН для створення лужного рН середовища або розчини органічних кислот – для кислого рН. В першому випадку виживають тільки лужно-, в другому – тільки кислототолерантні мікроби.

В лужних умовах виділяють мікобактерій – збудників туберкульозу, а також вібріонів – збудників холери (рН=8,5). При кислому рН із змішаної культури виростають лактобацили, мікроскопічні гриби та дріжджи (рН=5,3-5,5).

Додавання барвників

Додавання до твердих і рідких середовищ барвників: фуксину, генціан– або кристалвіолету, бриліантового або малахітового зеленого.

В залежності від концентрації дані барвники здатні подавляти розвиток грам+бактерій. Дозволяють виділяти сальмонели та ін. ентеробактерії, збудників туберкульозу.

Додавання антибіотиків

До поживних середовищ додають пеніцилін (від 0,5 до 194 од/мл), бацитрацин (2 од/мл), ванкоміцин, колістин, ністатин та ін.

Пеніцилін – для виділення мікоплазм, пеніцилін та бацитрацин для кампілобактеру, ванкоміцин, колістин, ністатин – для збудників гонореї.

1

2

3

4

Біохіміч-ний метод

Додавання органічних речовин

В агарові середовища додають фенілетанол, жовч та її солі, формалін або речовини – єдине джерело С для мікробів відповідних видів. (лактат, целюлоза, триптофан та ін.)

Фенілетанол (0,25%) – для виділення патогенних коків, жовч та її солі – для ентеробактерій та збудників чуми, триптофан – для псевдомонад, лактат – для пропіоновокислих бактерій.

Додавання солей

В поживні середовища вносять розчини NаС1 (7,5 – 25%), селеніту натрію (0,4%), ацетату талію (0,032%) або телуріту калію (0,001 - 0,038%).

7,5%-ний розчин NаС1 дозволяє вирости із змішаної культури патогенним кокам, селеніт натрію – сальмонелам, телуріт калію – вирости і придбати специфічне забарвлення колоній стрептококам (сине, сине-чорне) та коринебактеріям (сіре або чорне).

Біологіч-ний метод

Зараження живих організмів.

(тест об’єктів)

Суспензією патматеріалу заражають лабораторних тварин, курячі ембріони або культури клітин. Останнім методом користуються для накопичення клітин облігатних паразитів

Внутрішньо черевне введення мишам мокроти із патогенними пневмококами, морським свинкам – введення трупного матеріал при чумі або туляремії, зараження курячих ембріонів для виділення хламідій та рикетсій.