Техника окраски спор методом Трухильо
1.На фиксированный мазок накладывают небольшой кусочек фильтровальной бумаги и на нее наносят водный раствор малахитовой зелени.
2.Подогревают препарат на пламени горелки до появления паров и выдерживают в течение 3 минут
3.Промывают дистиллированной водой.
4.Докрашивают 0,25%-ным водным раствором основного фуксина 1 минуту.
5.Промывают водой и высушивают.
Микрокартина: споры зеленые, а вегетативные клетки красные.
Рис. 4. Споры микроорганизмов различных типов
Окраска капсул
Тело микробной клетки покрыто рыхлым слизистым слоем. У некоторых видов микроорганизмов этот слой развивается очень сильно и тогда он называется капсулой. Капсула - муциноподобное вещество, высокомолекулярный полисахарид, является производным наружного слоя оболочки. Наличие капсулы является важным диагностическим признаком при идентификации и дифференциации возбудителей некоторых инфекций (сибирской язвы, пневмококковой пневмонии и др.) (рис. 5). Патогенные микроорганизмы образуют капсулу в инфицированном организме. Она является фактором вирулентности и защищает бактериальную клетку от фагоцитоза и бактерицидного действия сыворотки крови. Капсульное вещество плохо окрашивается. Поэтому при приготовлении препарата для обнаружения капсулы выполняют следующие правила:
а) мазок готовят из свежего материала, так как капсула быстро лизируется;
б) фиксируют мазок химическим способом, для окраски применяют метохромотические краски, то есть при использовании которых цитоплазма окрашивается в один цвет, а капсула - в другой;
в) промывать мазок водой следует слабо и кратковременно.
Рис.5.Капсула у бактерий: а - бацилла сибирской язвы; б – диплококк
Техника окраска капсул по методу Ольта
Свежий горячий 2%-ный раствор сафранина наносят на фиксированный мазок, окрашивают 5-7 минут.
Быстро промывают водой и высушивают.
Тело клетки окрашивается в красно-кирпичный цвет, капсула в - желто-оранжевый.
Определение подвижности бактерий
Подвижности бактерий важный видовой признак и производиться при диагностических исследованиях: результат учитывают при идентификации микроорганизмов. У подвижных видов способность самостоятельного поступательного (и вращательного) движения обусловлена наличием жгутиков - специальных тонких нитевидных образований. Жгутики бывают различной длины. Их диаметр настолько мал, что они невидимы в световом микроскопе (менее 0,2 мкм). У разных групп бактерий количество и расположение жгутиков неодинаково. Жгутики плохо воспринимают красители. Методы сложной окраски искажают подлинный вид жгутиков, поэтому в лабораториях окраску жгутиков не осуществляют, а исследуют бактерии в живом состоянии.
Рис. 6. Типы расположения жгутиков у бактерий
В зависимости от расположения и количества жгутиков микробы подразделяют(рис. 7):
а) монотрихи - микроорганизмы имеющие на одном из полюсов один жгутик, движения активные, поступательные (псевдомонас);
б) лофотрихи - микробы имеющие на одном из полюсов пучок жгутиков (листерии);
в) амфитрихи - микробы, имеющие жгутики на обоих полюсах микробной клетки;
г) перитрихи - микробы, у которых жгутики расположены по всей поверхности клетки(E.coli).
Есть виды микроорганизмов, обладающие подвижностью, но жгутиков не имеют (спирохеты, лептоспиры). Их движение обусловлено импульсивными сокращениями двигательного фибриллярного аппарата микробной клетки.
Для определении подвижности у бактерий необходимо использовать культуру не старше суточного возраста, так как старые культуры утрачивают способность передвигаться.