VII. Задания, обязательные для выполнения

1. Составьте схему изолирования «металлических ядов» минерализацией. Объект исследований - печень.

2. Составьте схему изолирования ртути методом деструкции. Объект исследования — почки.

VIII. План работы на занятии

Работа на занятии состоит из следующих этапов:

- обсуждение вопросов изолирования и обнаружения исследуемых соединений;

- практическая работа по извлечению ядов.

Ход лабораторной работы

Подготовка объектов для общего исследования

Объекты, консервированные этиловым спиртом, вносят в фарфоровую чашку, подщелачивают раствором карбоната натрия и нагревают на водяной бане, имеющей температуру не выше 50°С, до испарения спирта. После этого исследуемые объекты подвергают минерализации. Если для исследования на наличие «металлических ядов» берут биологический материал, из которого ра­нее были отогнаны с водяным паром «летучие яды», то избыток воды из биоло­гического материала удаляют упариванием на водяной бане.

Методика минерализации органических веществ серной и азотной кислотами

100 г биологического объекта в колбе Кьельдаля заливают 75 мл окисли­тельной смеси (кислоты серная концентрированная, азотная концентрирован­ная, вода дистиллированная в соотношении 1:1:1). Колбу нагревают, добавляя при необходимости (потемнение жидкости) кислоту азотную разбавленную (1:1) по каплям до просветления жидкости. Концом минерализации считается момент, когда в колбе остается 15—20 мл бесцветной или окрашенной жидко­сти, которая не темнеет в течение 30 минут при постоянном нагревании, без до­бавления кислоты азотной. Охлажденный минерализат осторожно выливают в химический стакан, содержащий 30 мл дистиллированной воды, колбу Кьель­даля ополаскивают два раза дистиллированной водой по 10 мл, присоединяют промывные воды к разбавленному минерализату.

В маленькой фарфоровой чашке в 2-3 каплях концентрированной серной кислоты растворяют 2-3 кристалла дифениламина и к полученному бесцветному раствору прибавляют одну каплю разбавленного минерализата. В случав по­явления сине-голубого окрашивания проводят денитрацию минерализата.

Для этого стакан с минерализатом ставят на плитку, нагревают до кипе­ния, вносят одну каплю формалина; кипятят 10 минут и вновь проводят пробу с дифениламином в серной кислоте. В случае отсутствия голубого окрашивания жидкость кипятят до исчезновения запаха формалина, охлаждают, количест­венно переносят в мерную колбу на 200 мл и доводят дистиллированной водой до метки. Жидкость из мерной колбы переносят в сухую чистую склянку и ис­следуют по схеме А.Н. Крыловой дробным методом на наличие катионов, имеющих судебно-химическое значение.

Подготовка объектов для исследования на ртуть

.При исследовании на ртуть используют "мягкие" условия частичного разрушения органических веществ, не связанные с высокой температурой на­гревания, при которых происходит не минерализация, а лишь разрушение фор­менных элементов и расщепление сложных белковых комплексов (деструкция).

Деструкция тканей дает возможность предотвратить улетучивание ртути и обеспечивает переведение ее из нерастворимых белковых соединений в рас­творимые. Она . основана на использовании протекающей с выделением тепла каталитической реакции разложения азотной кислоты в присутствии этанола в небольших количествах и концентрированной серной кислоты. Нагревание на водяной бане в течение 10 мин способствует более глубокому течению процес­са деструкции.

Методика деструкции при исследовании на ртуть 20 г биологического объекта (печени или почек) вносят в колбу Кьельдаля, заливают последовательно при комнатной температуре реагентами: 1 мл этано­ла, 5 мл воды и 10 мл азотной кислоты. Затем из капельной воронки постепенно добавляют 20 мл концентрированной серной кислоты с такой скоростью, чтобы постоянно поддерживалась реакция разложения азотной кислоты, окислы азота при этом не должны выделяться из колбы. По окончании введения в реакцию серной кислоты колбу оставляют при комнатной температуре на 5 мин до пре­кращения выделения окислов азота. Затем содержимое колбы нагревают на ки­пящей водяной бане в течение 10—15 мин. При бурном течении реакции в колбу добавляют 30-50 мл горячей воды. Полученный горячий деструктат смешива­ют с двойным объемом кипящей воды и, не охлаждая, фильтруют через увлаж­ненный фильтр в колбу, содержащую 20 мл насыщенного раствора мочевины (денитрация). Фильтр и остатки жира промывают 2-3 раза горячей водой. Про­мывные воды объединяют с деструктатом, после охлаждения жидкость разбав­ляют водой до определенного объема, проверяют полноту проведения денитра­ции и исследуют на наличие и содержание ртути.