1.4. Метод микроскопии в темном поле
При микроскопии по методу темного поля препарат освещается сбоку косыми пучками лучей, не попадающими в объектив. В объектив микроскопа попадают лишь лучи, отклоненные частицами препарата в результате отражения, преломления или дифракции. В силу этого микробные клетки и другие частицы представляются ярко светящимися на черном фоне.
Для микроскопии в темном поле используется специальный конденсор и обычные объективы. Так как апертура иммерсионного объектива больше чем апертура конденсора темного поля, внутрь иммерсионного объектива вставляется специальная трубчатая диафрагма, снижающая его апертуру.
2. Морфология микроорганизмов
2.1. Морфология бактерий
П ознакомиться с морфологией бактерий c помощью изучения демонстрационных препаратов: а) стафилококка, стрептококка, сарцины (кокковые формы); б) монобактерии, стрептобациллы (палочковидные формы); в) вибриона (извитая форма), промикроскопировать и зарисовать. Обратить внимание на форму и взаиморасположение бактерий в каждом препарате.
Рис.1.
Staphylococcus
2
Рис.
2. Streptococcus
Рис.
3. Sarcina
Рис.4.
Monobacterium
Рис.5.
Streptobacillus
Рис.
6. Vibrio
Посмотреть под микроскопом препарат-мазок из культуры бактерий, имеющих жгутики, и зарисовать (рис. 7). Препарат окрашен по методу Бениньетти.
2.3. Наблюдение подвижности бактерий в препарате "висячая капля"
c помощью фазовоконтраcтного микроскопа.
Метод полужидких сред (Пешкова).
На обезжиренное покровное стекло нанести петлей небольшую каплю воды, с помощью бактериологической петли внести в нее незначительное количество исследуемой культуры ("облачко помутнения") и размешать ее, не размазывая капли.
Взять предметное стекло с углублением и края углубления смазать тонким слоем вазелина. Перевернув предметное стекло углублением вниз, наложить его на покровное стекло так, чтобы капля соответствовала средине углубления, и слегка прижать одно стекло к другому. Быстро перевернуть полученную влажную камеру покровным стеклом вверх и с помощью рукоятки петли прижать края покровного стекла, чтобы получить герметически замкнутую камеру. Капля должна висеть в камере, не сливаясь с ее дном.
Поместить препарат "висячая капля" на предметный столик микроскопа покровным стеклом вверх. Опустить конденсор, установить слабый объектив и отыскать край капли. Вывести край капли точно в центр поля зрения и закрепить препарат клеммами.
Приподняв тубус, поворотом револьвера поставить сильный сухой объектив (40×). Глядя сбоку, опустить объектив на расстояние, меньшее свободного рабочего (почти вплотную к покровному стеклу). Глядя в окуляр и уменьшив освещение диафрагмированием или опусканием конденсора, с помощью макровинта медленно поднять тубус до тех пор, пока не удастся увидеть край капли. Установив в фокусе край капли, сдвинуть его несколько в сторону, не теряя из поля зрения. Препарат зарисовать.
Метод полужидких сред (Пешкова)
С
Рис.
7. Жгутики бактерий.
Окраска
по Бениньети
Рис.
8. Препарат
«висячая
капля»
Рис.
9. Рост бактерий на среде Пешкова.
1
- подвижные бактерии;
2
неподвижные бактерии
1
2
