
- •Методические указания
- •Режим работы в бактериологической лаборатории.
- •Знакомство с иммерсионным микроскопом.
- •Упражнение в микроскопии на готовых препаратах с применением
- •Правила обращения с культурами микробов.
- •Приготовление препарата-мазка и его фиксация. Окрашивание мазка.
- •Основные преимущества и принципы контрастирования
- •Бактериоскопическое исследование препарата «раздавленная капля» и микропрепаратов контрастированных методами негативной окраски по Бурри, позитивной - фуксином.
- •Контрольные вопросы
- •Приложение к занятию 1
- •Определение понятий "микроорганизмы" и "вид"
- •Занятие № 2
- •План занятия
- •Методические указания
- •1. Микроскопические методы исследования
- •1.1. Электронная микроскопия
- •1.2. Фазовоконтрастная микроскопия
- •1.3. Метод люминесцентной микроскопии
- •1.4. Метод микроскопии в темном поле
- •2. Морфология микроорганизмов
- •2.1. Морфология бактерий
- •2.3. Наблюдение подвижности бактерий в препарате "висячая капля"
- •3. Сложные методы окраски микробов в изучении их структуры
- •3.1. Изучение структуры клеточной стенки бактерий, окраска по Граму
- •3.2. Включения у бактерий. Демонстрация препарата
- •3.3. Капсула бактерий, бактериоскопическое исследование препарата-мазка из культуры палочки Фридлендера окрашенного по методу Бурри-Гинса
- •Контрольные вопросы
- •Занятие № 3
- •План занятия
- •Методические указания.
- •Способы стерилизации и дезинфекции лабораторной посуды и
- •Определить по готовым посевам антибактериальное действие
- •Бактериологическое изучение антибактериального действия спирта,
- •Тестовый контроль по теме: «стерилизация и дезинфекция»
- •Знакомство с питательными средами, применяемыми для выращивания бактерий
- •Изучение характера роста бактерий на плотных и жидких питательных средах (культуры бактерий на мпа в чашках Петри и в пробирках, а также на мпб)
- •Пигменты бактерий. Демонстрация пигментных культур
- •Исследование смеси бактерий. Бактериоскопия смеси и посев ее на пластинки мпа с целью получения изолированных колоний
- •Контрольные вопросы
- •Приложение к занятию № 3
- •Занятие № 4
- •План занятия
- •Методические указания
- •1. Изучение физиологии микроорганизмов, классификации бактерий по типу дыхания и отношению к температуре. Знакомство с термостатом
- •Освоение техники пересева бактериальных культур с пластинок мпа на косячок мпа, с косячков мпа на косячок и пластинки мпа с помощью
- •Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия
- •Знакомство с составом дифференциально-диагностических питательных сред: Плоскирева, Эндо, Левина и др., особенностями роста различных
- •Изучение биохимической (ферментативной) активности бактерий.
- •Контрольные вопросы
- •Приложение к занятию № 4
Занятие № 2
Дата________________
Тема: МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.
МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. СТРОЕНИЕ
БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ
План занятия
1. Микроскопические методы исследования:
1.1. Электронная микроскопия.
1.2. Фазовоконтрастная микроскопия.
1.3. Метод люминесцентной микроскопии.
1.4. Темнопольная микроскопия.
2. Морфология микроорганизмов:
2.1. Морфология бактерий. Демонстрация готовых препаратов.
2.2. Жгутики бактерий. Демонстрация готовых препаратов.
2. 3.Наблюдение подвижности бактерий в препарате "висячая капля" и c помощью фазовоконтраcтного микроскопа. Метод полужидких сред (Пешкова).
3. Сложные методы окраски микробов в изучении их структуры:
3.1. Изучение структуры клеточной стенки бактерий, окраска по Граму.
3.2. Включения у бактерий. Демонстрация препарата «зерна волютина окраска по Нейссеру».
3.3. Капсула бактерий, бактериоскопическое исследование препарата-мазка из культуры палочки Фридлендера по методу Бурри-Гинса
3.4.Споры у бактерий. Исследование спор у Streptobacillus в неокрашенных препаратах (раздавленная капля) и в препаратах-мазках, окрашенных водным фуксином и по Клейну.
Методические указания
1. Микроскопические методы исследования
1.1. Электронная микроскопия
Возможности световых микроскопов ограничены волновой природой света. При оптимальных условиях световые микроскопы позволяют наблюдать, вследствие явления дифракции, объекты размером не менее 1/2 - 1/3 длины световой волны (около 0,2μ).
Наибольшими возможностями в смысле разрешающей способности обладают электронные микроскопы, в которых пучок света заменен пучком электронов, длина волны которых составляет 0,04-0,05Å. Теоретически разрешение просвечивающего электронного микроскопа составляет 0,002 нм, на практике современные электронные микроскопы дают разрешение не более 0,2 – 2 нм (в зависимости от типа объекта).
Принципиальная оптическая схема электронного микроскопа аналогична схеме светового микроскопа, в котором все оптические элементы заменены соответствующими электрическими: источник света заменен источником электронов, стеклянные линзы - линзами электромагнитными, В электронных микроскопах просвечивающего типа различают три системы: электронно-оптическую, электропитания, вакуумную.
Электронно-оптическая система снабжена двумя конденсорными, объективной, промежуточной и проекционной линзами, обеспечивающими увеличение электронного микроскопа от 300 до 200000 крат. Промежуточная и проекционная линзы обеспечивают плавное изменение увеличения при постоянном поле изображения.
Вакуумная система электронного микроскопа позволяет получать и поддерживать в процессе работы рабочий вакуум 2·10-4 мм рт. ст. в колонне микроскопа, производить шлюзование камеры объекта и фотокамеры.
Источником пуска электронов является электронная пушка, состоящая из V -образного вольфрамового термокатода, который при нагревании до 2900° С в результате термоэмиссии испускает свободные электроны, ускоряемые затем электростатическим полем, создаваемым между фокусирующим электродом и анодом. Электронный пучок затем формируется с помощью конденсорных линз и направляется на исследуемый объект. Электроны, проходя сквозь объект, за счет его различной толщины и плотности отклоняются под различными углами и попадают в объективную линзу, которая формирует первое увеличенное изображение объекта. После объективной линзы электроны попадают в промежуточную линзу, которая предназначена для плавного изменения увеличения микроскопа и получения диффракции с участков исследуемых образцов. Проекционная линза создает конечное увеличенное изображение объектов, которое направляется на флуоресцирующий экран. Благодаря взаимодействию быстрых электронов с веществом люминофора Флуоресцирующего экрана на нем возникает видимое изображение объекта. Увеличение конечного изображения на экране определяется как произведение увеличений, даваемых объективной, промежуточной и проекционной линзами.