- •Методические указания
- •Режим работы в бактериологической лаборатории.
- •Знакомство с иммерсионным микроскопом.
- •Упражнение в микроскопии на готовых препаратах с применением
- •Правила обращения с культурами микробов.
- •Приготовление препарата-мазка и его фиксация. Окрашивание мазка.
- •Основные преимущества и принципы контрастирования
- •Бактериоскопическое исследование препарата «раздавленная капля» и микропрепаратов контрастированных методами негативной окраски по Бурри, позитивной - фуксином.
- •Контрольные вопросы
- •Приложение к занятию 1
- •Определение понятий "микроорганизмы" и "вид"
- •Занятие № 2
- •План занятия
- •Методические указания
- •1. Микроскопические методы исследования
- •1.1. Электронная микроскопия
- •1.2. Фазовоконтрастная микроскопия
- •1.3. Метод люминесцентной микроскопии
- •1.4. Метод микроскопии в темном поле
- •2. Морфология микроорганизмов
- •2.1. Морфология бактерий
- •2.3. Наблюдение подвижности бактерий в препарате "висячая капля"
- •3. Сложные методы окраски микробов в изучении их структуры
- •3.1. Изучение структуры клеточной стенки бактерий, окраска по Граму
- •3.2. Включения у бактерий. Демонстрация препарата
- •3.3. Капсула бактерий, бактериоскопическое исследование препарата-мазка из культуры палочки Фридлендера окрашенного по методу Бурри-Гинса
- •Контрольные вопросы
- •Занятие № 3
- •План занятия
- •Методические указания.
- •Способы стерилизации и дезинфекции лабораторной посуды и
- •Определить по готовым посевам антибактериальное действие
- •Бактериологическое изучение антибактериального действия спирта,
- •Тестовый контроль по теме: «стерилизация и дезинфекция»
- •Знакомство с питательными средами, применяемыми для выращивания бактерий
- •Изучение характера роста бактерий на плотных и жидких питательных средах (культуры бактерий на мпа в чашках Петри и в пробирках, а также на мпб)
- •Пигменты бактерий. Демонстрация пигментных культур
- •Исследование смеси бактерий. Бактериоскопия смеси и посев ее на пластинки мпа с целью получения изолированных колоний
- •Контрольные вопросы
- •Приложение к занятию № 3
- •Занятие № 4
- •План занятия
- •Методические указания
- •1. Изучение физиологии микроорганизмов, классификации бактерий по типу дыхания и отношению к температуре. Знакомство с термостатом
- •Освоение техники пересева бактериальных культур с пластинок мпа на косячок мпа, с косячков мпа на косячок и пластинки мпа с помощью
- •Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия
- •Знакомство с составом дифференциально-диагностических питательных сред: Плоскирева, Эндо, Левина и др., особенностями роста различных
- •Изучение биохимической (ферментативной) активности бактерий.
- •Контрольные вопросы
- •Приложение к занятию № 4
Приложение к занятию 1
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИИ
Бактериоскопический метод основан на обнаружении микроорганизмов в нативных или окрашенных препаратах патологического материала, определении вида возбудителя заболевания по форме, взаиморасположению и способности окрашиваться определенными красителями.
Бактериологический метод основан на выделении чистой культуры возбудителя заболевания и его идентификации (определение вида микроба).
Серологический метод основан на определении специфических антител в крови больных или переболевших инфекционными заболеваниями к соответствующим возбудителям с помощью различных реакций (агглютинации, пассивной гемагглютинации, связывания комплемента, преципитации и других).
Биологический метод - заражение лабораторных животных исследуемым материалом от больного с целью воспроизведения у них инфекционного заболевания или последующего выделения возбудителя.
Аллергический метод заключается в обнаружении повышенной чувствительность макроорганизма к определенным возбудителям инфекционных заболеваний или продуктам их жизнедеятельности. Для аллергических проб используют препараты, которые называются аллергенами.
Хемотаксономический метод – изучение микробов по продуктам их жизнедеятельности непосредственно в организме (без предварительного культивирования на питательных средах), применяют газовую и газожидкостную хроматографию.
Молекулярно-биологический метод – изучение состава микробных нуклеиновых кислот с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), секвенирования и гибридизации ДНК или РНК для их видовой идентификации.
ПРИЗНАКИ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ
МИКРООРГАНИЗМОВ (для определения вида микроба)
Морфологические - форма, величина, характер взаиморасположения микробов.
Тинкториалные - способность микробов окрашиваться различными красителями, характер окраски.
Культуральные - особенности роста микробов на жидких и плотных питательных средах.
Биохимические - способность микроорганизмов потреблять различные вещества (углеводы, белки и другие) с образованием характерных конечных продуктов, или наличие у микроорганизмов различных ферментов (уреаза, цистеиназа и другие).
Антигенные - особенности химического состава микробных клеток (антигенной структуры), выявляемые с помощью специфических диагностических иммунных сывороток,
Чувствительность к специфическим фагам - способность бактерий лизироваться эталонными специфическими фагами.
Биологические свойства. Токсигенность - способность продуцировать экзотоксин. Чувствительность к определенным колицинам или тип синтезируемых колицинов.
Определение понятий "микроорганизмы" и "вид"
Микроорганизмы - это невидимые простым глазом живые существа, включающие в себя представителей всех царств жизни - плазмиды, вирусы, прокариоты (эубактерии и архебактерии) и эукариоты. Они стоят на низших ступенях эволюции и играют важную роль как в общей экономике природы, так и в патологии человека, животных и растений А.И. Коротяев).
Вид - совокупность микроорганизмов, имевших общий корень происхождения, сходный генотип (более 80% гомологии ДНК) и максимально близкие фенотипические признаки и свойства (А.И. Коротяев).