4. Основные преимущества и принципы контрастирования

микропрепаратов. Знакомство с основными анилиновыми красителями.

Окрашивание препаратов позволяет быстро настроить препарат, рассмотреть детали. Контрастирование подразделяется на негативное и позитивное, которое в свою очередь делиться на простое и сложное.

Примером негативного контрастирования является окраска по Бурри, которая производиться следующим образом на чистое предметное стекло наносят каплю воды и рядом с ней каплю туши. В каплю воды вносят небольшое количество исследуемой культуры (получается облачко помутнения). Прокалив и остудив петлю, готовят равномерную взвесь бактерий. Затем соединяют эту каплю с каплей туши, тщательно перемешивают и размазывают по стеклу тонким слоем. Высушивают мазок на воздухе и микроскопируют с иммерсионным объективом. При микроскопии препарата рекомендуется начинать с более светлых участков его, а затем переходить на более темные. При грамотно выполненной окраске тушь заполняет пространство между микробами, обеспечивая темный фон вокруг неокрашенных объектов.

В позитивном контрастировании бактерий (окрашивании самого объекта фон остается светлым) в основном используют анилиновые красители. В микробиологической практике наиболее часто используются следующие анилиновые красители: 1) красные (фуксин основной, фуксин кислый, сафранин, нейтральный красный, конгорот); 2) синие (метиленовый и толуидиновый синие и др.); 3) фиолетовые (генциан фиолетовый, метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый); 4) желто-коричневые (везувин, хризоидин); 5) зеленые (бриллиантовый зеленый, малахитовый зеленый). Красители выпускаются в сухом виде, из них готовят основные насыщенные спиртовые растворы, которые могут храниться довольно продолжительно. Для приготовления рабочих растворов основной насыщенный спиртовый раствор красителя разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10.

4. Бактериоскопическое исследование препарата «раздавленная капля» и микропрепаратов контрастированных методами негативной окраски по Бурри, позитивной - фуксином.

П ромикроскопировать, сравнить контрастность и соответственно доступность изучения бактерий в препарате «раздавленная капля» и негативная окраска по Бурри зарисовать. Самостоятельно настроить мазки, изготовленные и окрашенные простыми методами на занятии и зарисовать их.

Рис. 4 Препарат «раздавленная капля»

Рис. 5 Негативная окраска по Бурри

Рис.6 Исследуемый микропрепарат окраска фуксином

Контрольные вопросы

1. С чем связаны и в чем заключаются особенности обучения в учебных комнатах кафедры микробиологии?

2. От чего зависит разрешающая способность микроскопа?

3. Почему иммерсионные объективы имеют более высокую разрешающую способность по сравнению с сухими объективами?

4. Что такое нумерическая апертура, и по какой формуле она определяется?

5. Чему равны разрешающая способность современных оптических микроскопов и их полезное увеличение?

6. На какой высоте должен находиться при микроскопии конденсор?

7. Каким зеркалом следует пользоваться при работе на микроскопах, снабженных конденсором?

8. Какова последовательность настройки микроскопа с использованием иммерсионного объектива?

9. Какие правила техники безопасности при работе с микроскопом необходимо соблюдать?

10. Чему равны свободные рабочие расстояния объективов микроскопов и для чего необходимо их знать?

11. Каким винтом микроскопа следует производить наводку на резкость?

12. Какие основные принципы необходимо соблюдать при работе с микробной культурой?

13. Как следует производить наводку" микроскопа на резкость, чтобы избежать повреждения объектива и препарата?

14. Как правильно приготовить бактериологическую петлю?

15. Как следует держать пробирку, петлю и пробку при взятии материала для приготовления препарата?

16. Как предохранить культуру микроорганизма от загрязнения из воздуха?

17. Какие недостатки имеет неокрашенный препарат "раздавленная капля"?

18. Какие подходы в контрастировании бактерий Вам известны?

19. Как производится негативная окраска препарата по Бурри?

20. Как выглядят бактерии в препарате, приготовленном по Бурри?

21. Какие основные красители красного, синего, фиолетового и ко­ричневого цвета применяются в микробиологии?

22. Какие способы окрашивания микробов Вы знаете?

23. Из каких последовательных этапов складывается приготовление препарата-мазка?

24. Для чего необходима фиксация препарата-мазка?

25. Какие способы фиксации препаратов Вы знаете?

26. Как производится фиксация на пламени и как контролируется ее качество?

27. Как определить, на какой стороне стекла находится мазок?

28. Какие методы микробиологической диагностики Вам известны, в чем они заключаются?

29. Какие признаки необходимо изучить для идентификации изучаемых бактерий?

30. Дайте определение понятиям «микроорганизм», «вид».