Упражнение в микроскопии на готовых препаратах с применением
иммерсионной системы.
О
знакомиться
и зарисовать микропрепараты дрожжей
при увеличении 8× и 40×, пользуясь
изложенными сведениями, научиться
быстро и правильно устанавливать
препарат, используя иммерсионный
объектив. Рассматривая препарат, следует
обратить внимание на резкое увеличение
числа разрешаемых подробностей при
работе с иммерсионным объективом по
сравнению с сухими объективами.
Рис.1 Дрожжевые клетки Рис.2 Дрожжевые клетки Рис.3 Дрожжевые клетки
объектив 8x объектив 40x объектив 90x
Правила обращения с культурами микробов.
Для безопасной и эффективной работы необходимо усвоить основные приемы бактериологической техники: обращение с культурами микробов, использование бактериологической петли, спиртовок, способы обеззараживания использованного материала и отработанных стекол.
При работе с культурами микроорганизмов необходимо соблюдать следующие три основных принципа: 1 - не загрязнить микробами окружающей среды, 2 - не заразить самого себя и 3 - не загрязнить культуру посторонними микробами из окружающей среды, так как точная идентификация исследуемого возбудителя заболевания возможна лишь при условии выделения и сохранения его в чистой культуре.
Культуру бактерий сохраняют обычно на жидких и плотных питательных средах в пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками. При всех манипуляциях с культурой (приготовление мазка, пересев ее с одной среда на другую и т.д.) используют стерильную бактериологическую петлю из металлической проволоки. Правильно приготовленная петля диаметром от 1 до 5 мм должна быть полностью замкнута. Петлю стерилизуют прокаливанием докрасна проволоки в пламени горелки, держа ее сначала вертикально, затем проводят 3-4 раза через пламя прилегающую к петле часть петледержателя. После такой тщательной стерилизации петля может быть внесена в пробирку с культурой, но перед прикосновением ее необходимо остудить о внутреннюю поверхность.
Приготовление препарата-мазка и его фиксация. Окрашивание мазка.
Чистое обезжиренное предметное стекло (стекло натирают хозяйственным мылом до появления белесого налета, тщательно снимают налет тканевой салфеткой) поместить на мостик и нанести каплю, воды с помощью бактериологической петли. Затем бактериологическую петлю взять в правую руку, как ручку или карандаш, а пробирку в левую руку между большим и указательным пальцами с тыльной стороны кисти почти в горизонтальном положении. При этом должна быть хорошо видна поверхность питательной среды с культурой бактерий.
Простерилизовав петлю, правой рукой захватить пробку, прижимая ее мизинцем к ладони, вынуть над пламенем горелки и, не выпуская пробку из руки (в таком положении она сохраняется в течение последующих манипуляций) обжечь края пробирки. Петлю ввести в пробирку, остудить прикосновением к внутренней стороне стекла и взять ею небольшое количество культуры, стараясь не захватить при этом питательной среды. Вынув петлю, опять обжечь края пробирки и закрыть ее. Не выпуская петли из руки, поставить пробирку в штатив и приступить к приготовлению мазка. В левую руку большим и указательным пальцами взять стекло за короткие грани и поднести к себе, внести бактерии, прикосновением петлей к капле воды, до появления в ней облачка помутнения. Прокалить и остудить петлю и, перемешав каплю, размазать ее тонким слоем по стеклу, после чего петлю снова прокалить и поставить в штатив. Правильно выполненный мазок должен быть круглым или овальным, в диаметре 1,5 – 2 см., тонким и равномерным
Подсушить приготовленный мазок на воздухе.
Зафиксировать мазок жаром, для этого стекло взять большим и указательным пальцами за край стекла мазком вверх и 3-4 раза провести через наиболее горячую часть пламени горелки (на границе светлой и темной его части). При этом рука описывает окружность диаметром 25 см. Фиксирование считается хорошим, если стекло, приложенное к тыльной поверхности кисти, дает ощущение легкого жжения. При отсутствии такого ощущения фиксацию необходимо повторить.
Положить препарат на мостик для окраски мазком вверх и налить на неге раствор краски - фуксин Пфейффера или метиленовый синий. Окраска фуксином производится в течение 1-2 минут, метиленовым синим - в течение 3-5 минут,
Слить краску и тщательно промыть препарат водой. Обсушить препарат фильтровальной бумагой. Микроскопировать с иммерсионным объективом. Микроскопическую картину зарисовать в тетрадь.