Занятие № 4

Дата________________

Тема: БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. ФИЗИОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ. ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

План занятия

1. Изучение физиологии микроорганизмов, классификации бактерий по типу дыхания и отношению к температуре. Знакомство с термостатом.

2. Освоение техники пересева бактериальных культур с пластинок МПА на косячок МПА, с косячков МПА на косячок и пластинки МПА с помощью бактериальной петли и шпателя.

3. Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия колоний, выросших на пластинках МПА. Посев колоний на косячки МПА для получения чистых культур.

4. Знакомство с составом дифференциально-диагностических питательных сред: Плоскирева, Эндо, Левина и др., особенностями роста различных культур бактерий на них.

5. Изучение биохимической (ферментативной) активности бактерий. Знакомство со средами "пестрого ряда", принципами их конструирования и характером изменений в результате роста бактерий. Посев бактерий на среды "пестрого ряда" для изучения их сахаролитических и других биохимических свойств.

Методические указания

1. Изучение физиологии микроорганизмов, классификации бактерий по типу дыхания и отношению к температуре. Знакомство с термостатом

Для культивирования бактерий необходимо знать и создавать условия для размножения микроорганизмов in vitro. Питание и рН, обеспечивается с помощью питательных сред, знакомство с которыми Вы начали на прошлом занятии, однако следует также учитывать особенности дыхания и температурного режима, которые необходимо обеспечить для получения интересующей Вас культуры. Оптимальная температура для большинства патогенных бактерий соответствует температуре тела человека и составляет 37⁰С. Поддержание постоянства температуры при инкубации посевов осуществляется с помощью термостата. Познакомиться с его устройством и основными режимами культивирования бактерий и грибов.

2. Освоение техники пересева бактериальных культур с пластинок мпа на косячок мпа, с косячков мпа на косячок и пластинки мпа с помощью

бактериальной петли и шпателя

Познакомиться с демонстрацией всех видов посевов, осуществляемых преподавателем, еще раз обратить внимание на положение открываемых пробирок и чашек Петри относительно пламени спиртовки (асептическая зона работы 10 – 15 см.), относительно стола и человека осуществляющего манипуляции. Обратить внимание, что все действия осуществляются одним человеком, ассистенция недопустима.

2. Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия

колоний, выросших на пластинках МПА. Посев колоний на косячки МПА для получения чистых культур

Просмотреть посевы смеси бактерий, произведенных на прошлом занятии, на наличие изолированных колоний. Выбрать одну колонию и изучив ее макро- и микроскопически описать ее. В описании внешнего вида колоний учитывают следующие свойства: размер (диаметр, в мм.); край колонии (ровный, фестончатый, лопастной); поверхность колонии (влажная или сухая, гладкая или шероховатая, складчатая или ровная, плоская или выпуклая и т.д.); прозрачность колонии (прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная); наличие пигмента и цвет его; консистенция колонии (плотная, рыхлая, слизистая). Из описанной колонии приготовить препарат-мазок, окрасить фуксином Пфейффера, зарисовать препарат и зарегистрировать морфологию бактерий в протоколе, затем при помощи бактериальной петли сделать посев на косячок МПА. Для этого необходимо простерилизовать петлю, приподнять крышку чашки Петри и стерильной петлей прикоснуться к колонии. После этого в левую руку берется пробирка с косячком МПА (между большим и указательным пальцами) так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирка открывается над пламенем горелки, обжигается ее край, а затем петля вводится в пробирку до дна ее, где имеется небольшое количество конденсационной влаги. Плоской поверхностью петли прикасаются к поверхности скошенного агара и делают посев штриховыми движениями, постепенно продвигаясь снизу вверх. Обжигают на пламени спиртовки край пробирки и закрывают ее над пламенем спиртовки. На пробирке восковым карандашом надписывают название культуры, дату посева, фамилию и группу студента и ставят посев до следующего занятия в термостат. Результаты работы оформляют в виде протокола по следующей форме.

Протокол исследования колонии.

1.Размер колонии_______________________________________

2.Форма колонии_______________________________________

3. Поверхность колонии_________________________________

4. Края колонии________________________________________

5.Прозрачность колоний_________________________________

6.Пигмент_____________________________________________

7.Консистенция________________________________________

8.Форма бактерий______________________________________

9. Взаиморасположение бактерий_________________________

10.Латинское морфологическое название бактерий_____________________