Контрольные вопросы
Что такое стерилизация?
Что такое дезинфекция?
Чем отличается стерилизация от дезинфекции?
Какие методы физической дезинфекции Вам известны, механизм их действия, бактерицидная эффективность?
Какие категории химических дезинфектантов применяются в стоматологической практике, с какой целью?
Какие методы используют для стерилизации?
Какие предметы лучше подвергать стерилизации сухим жаром?
Что такое дробная стерилизация?
Когда она применяется?
Что такое пастеризация и тиндализация, в каких случаях они применяются?
Как устроен автоклав?
Какой порядок работы с автоклавом?
Какие методы контроля качества стерилизации Вам известны?
Какова методика бактериологического контроля эффективности стерилизации?
Что такое стерилизация фильтрованием?
Каким требованиям должны удовлетворять питательные среды для выращивания микробов?
Какие виды питательных сред применяются в бактериологической практике?
Что такое агар, и для какой цели он применяется?
Что такое универсальная питательная среда?
Какие сложные (специальные) среды Вы знаете?
Каково назначение элективных (избирательных) питательных сред?
Каково назначение дифференциально-диагностических сред?
Какова оптимальная температура для выращивания патогенных микробов?
Какие изменения происходят в жидких питательных средах при росте бактерий?
Какие признаки колоний имеют дифференциальное значение?
Какие формы колоний вы знаете?
Почему пигмент у одних видов бактерий окрашивает только колонии, а у других - колонии и питательную среду?
Как следует держать бактериологическую петлю при посеве бактерий на пластинки МПА в чашках Петри и при посеве на косячки?
Какие методы микробиологической диагностики инфекций Вы знаете?
Какова последовательность исследования смеси бактерий?
Для чего необходимо получить рост изолированных колоний, дать определение терминов «колония», «культура», «штамм»?
Какие методы посева используют для получения изолированных колоний?
Как предупредить загрязнение питательных сред бактериями из воздуха?
Как избежать повреждения плотной питательной среды при посеве бактериальной петлей?
Какие правила необходимо соблюдать при пересеве культуры?
С какой целью получают чистые культуры?
Почему нельзя работать со смешанными культурами?
В чем различия между бактериоскопическим и бактериологическим исследованием?
Приложение к занятию № 3
Определение понятия «деконтаминация», «стерилизация», «дезинфекция», «асептика».
Деконтаминация – удаление микробного загрязнения на каких-либо объектах до безопасного уровня или полного уничтожения.
Стерилизация – это полное уничтожение всех форм жизни микроорганизмов (включая бактериальные споры) на поверхности и внутри предметов, а также в жидкостях и в воздухе.
Дезинфекция – это уничтожение патогенных микробов и снижение общей микробной обсемененности материала или объекта. Однако следует помнить, что не существует универсальных дезинфицирующих средств, которые при
|
Рис.3.
Схема строения автоклава типа АВ-1.
Обозначения: 1.Крышка.
2.Стерилизационная
камера. 3.Водоуказательная колонка.
4.Мановакууметр.
5.Фильтр.
6.Выпуск
конденсата. 7.Электронагреватель.
8.Водопаровая камера. 9.Электроконтактный
манометр.
10.Предохранительный
клапан. 11.Выпуск пара для создания
отрицательного давления. |
применении могли бы убить все известные патогенные бактерии, т. е. дезинфектанты применяемые в «чистой клинике», малоэффективны например, в туберкулезном диспансере. Дезинфицирующие средства не столь универсальны в сравнении с методами стерилизации.
Асептика – система профилактических мероприятий, направленная не предотвращение попадания микроорганизмов в рану, в лекарственное вещество, на питательные среды, материал для исследования, чистую культуру и т.д.
Основные методы дезинфекции.
Табл. 1.Основные методы дезинфекции, применяемые в
микробиологической и медицинской практике
№/п. |
Метод дезинфекции |
Форма (вещество), объект, режим обработки |
Механизм и бактерицидная эффективность воздействия |
Контроль эффективности |
Физические методы |
||||
1 |
Механический |
Вытряхивание, проветривание помещений, влажная уборка, стирка с моющими средствами, фильтрование растворов
Наиболее эффективно фильтрование через асбестовые и целлюлозные бактериологические фильтры |
Механически удаляет с или в объекте микробы, не может сопровождаться обеззараживанием объекта, значительно уменьшает число патогенных микробов
Эффективен против всех форм жизни, исключая вирусы, микоплазмы и фильтрующиеся формы некоторых видов бактерий |
Бактериологический. Метод смывов. Исследуют 1 % не менее 3 – 5 единиц одновременно обработанных изделий, одного наименования. Смыв осуществляют марлевыми салфетками, по 0,1 мл смыва засевают на поверхность желточно-солевого агара, кровяного агара и среды Эндо. Среды инкубируют при 370 С в течение 48 часов. В случае отсутствия роста S. aureus, P. aeruginosa и бактерий группы кишечной палочки (БГПК), проведенная дезинфекция изделий медицинского назначения считается качественной. |
2 |
Обработка высокой температурой |
Кипячение в дистиллированной воде (дезинфекция стеклянных, металлических, резиновых изделий) не менее 30 минут с момента закипания, в 2 % растворе бикарбоната натрия (соды) – 15 мин.
Пастерилизация, заключается в нагревании жидкости до 50 – 600С в течение 15 – 30 мин, 70 – 800 С в течение 5 – 10 мин. Применяют для увеличения срока хранения молока, пива, вина |
Вызывает денатурацию белка, что приводит к уничтожению вирусов, грибов вегетативных формы бактерий и простейших, сохраняют жизнеспособность споры большинства бактерий, цисты некоторых простейших и резистентные вирусы.
Частичная деконтаминация пищевых продуктов, уничтожение форм вызывающих молочнокислое, уксусное и др. виды брожения направлены на увеличение срока хранения продуктов. |
|
3 |
УФ-лучи |
Проводят ртутными бактерицидными лампами БУВ – 15, БУВ – 30, длина излучения 253 – 265 нм, более современные ксеноновые лампы. Применяется для дезинфекции воздуха и поверхностей в микробиологических лабораториях, боксах, операционных, перевязочных и др. помещениях лечебно-профилактических учреждений |
Действует на ДНК, вызывая образование димеров тимина - летальная мутация, достаточно эффективное средство для обработки поверхностей, воздуха, прозрачных растворов, но в связи с низкой проникающей способностью не пригодны для обработки иных объектов |
Бактериологический (см. методические указания к занятию № 3 пункт. 2) |
Химические методы |
||||
1 |
Обработка хлорсодержащими препаратами |
Хлорная известь, хлорамин Б, гипохлорит кальция, гипохлорит натрия, используются для хлорирования воды, обработки полов, поверхностей мебели в палатах, стен, для замачивания инструментов в предстерилизационной обработке |
Окисляют или галогенизируют (йод соединяется с остатками тирозина) белки. Действует на чувствительные формы бактерий, грамположительных кокков и грамотрицательные бактерии, вызывающие кишечные инфекции. |
То же, что в методах 1 - 2 |
|
Обработка окислителями |
Перекись водорода с моющим средством и без него, перманганат калия. Применяют для предстерилизационной обработки лечебного и бактериологического инструмента |
Повреждают ферментные системы микроорганизмов, уничтожают вегетативные, а в некоторых случаях и споровые формы. |
|
|
Обработка фенолами |
Карболовая кислота, лизол, используются для обработки полов, поверхностей мебели в палатах, стен, для замачивания инструментов в предстерилизационной обработке. Лизол может применяться в инфекционной больнице, в туберкулезном диспансере, их нетоксичные производные, пр. гексахлорофен для антисептики |
Денатурируют белки, повреждают клеточные мембраны. Высокоэффективны против вегетативных форм бактерий |
|
|
Обработка спиртами |
70 % водный раствор этанола. Используют для дезинфекции, в основном обработке рук персонала мед учреждений, рабочих поверхностей мебели и антисептики |
Растворяет липиды, денатурирует белки. Обладает антибактериальной и антифунгицидной активностью, но не эффективен против некоторых вирусов и спор бактерий. |
|
|
Обработка формальдегидами |
Формалин. Используется для дезинфекции при работе с устойчивыми видами бактерий, в том числе возбудителями особо опасных инфекций, туберкулеза и т.п. обладает выраженной противовирусной активностью |
Денатурирует белок, является мощным мутагеном. Применяется в качестве дезинфектанта, высокотоксичен для человека. Высокоэффективен против всех вегетативных форм и вирусов. |
|
|
Применение поверхностно-активных веществ - ПАВ |
Мыло и детергенты.
Катионные детергенты, в том числе четвертично-аммониевые соединения ЧАС |
Обеспечивают механическое удаление микробов с поверхности кожи и объектов внешней среды. Нарушают функцию фосфолипидов мембран |
|
Предстерилизационная обработка.
Материалы, оборудование контактировавшие с микроорганизмами, в бактериологической лаборатории; с биологическими жидкостями и тканями пациента в стоматологической клинике перед стерилизацией необходимо подготовить. В большинстве случаев, в начале, его необходимо продезинфицировать или простерилизовать, пр.: пробирки с культурами бактерий, затем механически или химически очистить, промыть, высушить, упаковать с помощью специальной бумаги, биксов, двойной мягкой упаковки из бязи, в коробках с фильтром и т.д. Режим очистки и высушивания определяются видом изделия и характером загрязнения. В стоматологических ЛПУ контроль качества очистки проводит центр ГСЭН, который один раз в квартал, проверяет не менее 1 % изделий обработанных за смену. Качество оценивают путем постановки амидопиридиновой пробы на остаточные количества крови и фенолфтолеиновой пробы на остатки щелочных компонентов моющих средств.
Основные методы стерилизации
Табл. 2. Основные характеристики методов стерилизации, применяемых в микробиологии и стоматологии
№/п. |
Метод |
Оборудование и материалы |
Режим обработки |
Материал |
Физические методы |
||||
1. |
Прокаливание на пламени |
Спиртовка |
До красного каления |
Бактериологические петли, мелкие металлические инструменты |
2. |
Обжиг (объект смачивают 96 % спиртом и обжигают в пламени горелки) |
Спиртовка |
До окончания горения спирта на объекте |
Бактериологический шпатель, др. мелкие стеклянные и более крупные пр. пинцет инструменты |
3. |
Сухим жаром |
Сухожаровой шкаф (печь Пастера) |
1800 С, 60 мин (1600 С, 150 мин) |
Металлические инструменты, стеклянная посуда, градуированные и пастеровские пипетки, вату, марлю в бумажных пакетах |
4. |
Паром под давлением |
Автоклав |
1200 С, 1 атм. – 45 мин; 1320 С, 2 атм. – 20 мин |
Питательные среды (МПА, МПБ), заразный материал, изделия из стекла, металла, латекса, халаты, белье, перчатки, перевязочный, шовный материал, некоторые лекарства |
5. |
Текучим паром (дробная стерилизация) |
Аппарат Коха или автоклав с открытой выпускной трубкой |
1000 С в течение 30 мин. с интервалом в 24 часа трехкратная обработка |
Применяется для молока, желатина, питательных сред и растворов, содержащих витамины, некоторые углеводы, картофельный крахмал, аммиачные соли |
6. |
Тиндализация |
Водяная баня с терморегулятором |
56 – 580 С, 5 дней: 1 день 2 ч., остальные по 1 ч. |
Витамины, белковые жидкости (сыворотка, асцитическая жидкость, питательные среды, содержащие белок) |
7. |
В среде горячих стеклянных шариков |
Стерилизатор, заполненный стеклянными шариками |
|
Зубные боры, рабочие части зондов, гладилок и другие стоматологические инструменты |
8. |
Лучевая стерилизация |
γ - излучение или с помощью ускоренных электронов в специальной бетонной камере |
В промышленных масштабах в течение нескольких часов |
Для стерилизации одноразовых инструментов, хирургический инструментарий, изделия из пластмасс, пр. шприцы, перчаток, белья вакцин, иммунных сывороток и лекарственных средств. |
Механический метод |
||||
9. |
Фильтрование |
Фильтры из коллодия диаметр пор, которого меньше вирусов |
Фильтрование проводится или под повышенным давлением – жидкость нагнетается в приемник, или разреженным давлением в приемнике вызывая всасывание жидкости в приемник |
Сыворотка, ряд лекарственных веществ |
Химический метод |
||||
10. |
Растворами химических средств |
6 % раствор перекиси водорода |
Экспозиция 6 ч. с полнм погружением и заполнением полостей |
Изделия из полимерных материалов, стекла, коррозионностойких металлов |
4,8 % раствор первомура |
Экспозиция 15 мин |
Лигатурный шовный материал |
||
11. |
Газовая стерилизация |
Окись этилена, окись этилена с бромистым метилом, озон, пары раствора формальдегида в этиловом спирте Стационарные газовые стерилизаторы, портативные анаэростаты (метод не безопасен для людей и окружающей среды, т.к. стерилизующие агенты остаются на объекте) |
При температуре от 35 до 550 С выдерживают от 4 – 16 ч. до 1 – 21 сут. В зависимости от вида газа, стерилизатора, объекта стерилизации |
Оптика, кардиостимуляторы, сложной техники, наконечников турбин стоматологических установок |
12. |
Плазменная стерилизация |
Плазменный стерилизатор, в котором применяется стримерный разряд в аргоне при атмосферном давлении |
10 – 15 мин. |
Для стерилизационной обработки инструментов и стоматологических оттисков (слепков) |
Контроль эффективности стерилизации осуществляется: во-первых, по показаниям приборов, контролирующих набор заданной температуры, давления и т.д.; во-вторых, с использованием физико-химических тестов, в которых используются тест-вещества, которые в виде кристаллов в ампулах или бумажных индикаторов закладываются и стерилизуются с основным объектом стерилизации, при соответствующей обработке кристаллы спаиваются, а индикаторы меняют цвет (например, ампулы с бензойной кислотой в которых вещество виде белых кристаллов с гранулами красного красителя после автоклавирования спаиваются в единый конгломерат малинового цвета; теомочевина с синими кристаллами красителя при обработке сухим жаром образует монолит цвета морской волны).
Бактериологические лаборатории осуществляют контроль качества стерилизации бактериологическим методом. Он включает в себя несколько подходов: во-первых, это прямой посев (погружение) изделия в питательные среды целиком, фрагментов шовного и перевязочного материала, стерильность крупных изделий контролируется методом смывов. Пробы для исследования (не менее 1 % из одной упаковки) засевают на сахарный бульон, тиогликолевую среду выдерживают при 320 С, на среду Сабуро – при 220 С в течение 7 сут. Во-вторых, используют чашки Петри с салфеткой, пропитанной для стерилизации паром под давлением - Bacillus stearotermophilus, сухим жаром – Bacillus licheniformis, после стерилизации салфетки помещают в МПБ и инкубируют при 370 С в течение 48 ч., при качественной стерилизации бульон остается прозрачным.
Определение понятий «колония», «культура», «штамм»
Колония – видимая невооруженным глазом изолированное скопление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее).
Культура – вся совокупность бактерий, выросшая на плотной или жидкой питательной среде, выделяют чистую культуру (популяция бактерий состоит из представителей одного вида) и смешанную (содержит представителей нескольких видов).
Штамм – это чистая культура, выделенная из одного источника, в конкретный момент времени; конкретный образец, популяция данного вида.