Горизонтальное элюирование

Объемы растворов анализируемых веществ, указанные в частной статье, наносят небольшими порциями, получая круглые пятна (от 1мм до 2мм в диаметре) или полосы (длиной от 5мм до 10мм и шириной от 1мм до 2мм) на подходящем расстоянии от нижнего края и от боковых краев пластинки. Растворы наносят на линию, параллельную нижнему краю пластинки, с интервалом не менее 5мм между нанесенными пробами. После испарения растворителей из нанесенных проб, в желоб хроматографической камеры вводят с помощью шприца или пипетки достаточное количество подвижной фазы, помещают пластинку горизонтально в хроматографическую камеру и подсоединяют устройство для подачи подвижной фазы в соответствии с инструкцией производителя. Если указано в частной статье, пластинку элюируют, начиная одновременно с двух концов. Камеру закрывают и проводят хроматографирование при температуре от 20⁰С до 25⁰С. После того, как подвижная фаза пройдет расстояние, указанное в частной статье, пластинку вынимают, сушат и обнаруживают пятна указанным способом.

В случае двухмерной хроматографии после первого хроматографирования пластинку сушат и выполняют второе хроматографирование в направлении, перпендикулярном первому.

Визуальная оценка

Идентификация. Основное пятно на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном на хроматограмме, полученной для раствора стандартного образца (раствора сравнения), сравнивая окраску (цвет флюоресценции), размер и величину удерживания (R_f) обоих пятен.

Величину удерживания (R_f) определяют как отношение расстояния от точки нанесения пятна до верхней кромки пятна после хроматографирования к расстоянию, пройденному фронтом растворителя от точки нанесения.

R_f=

где а - расстояние от линии старта до центра пятна;

b - расстояние от линии старта до фронта подвижной фазы.

Более точной оценкой хроматографической подвижности, мало чувствительной к влиянию случайных отклонений в условиях проведения эксперимента, является величина R_s, представляющая собой отношение величины Rf одного вещества к величине R_f другого вещества, принятого за стандарт:

R_s=

Испытание на сопутствующие примеси. Дополнительное пятно (пятна) на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном (пятнами) на хроматограмме, полученной для раствора сравнения. В качестве стандартного образца для приготовления раствора сравнения используют как саму примесь (примеси), так и различные разбавления испытуемого раствора.

Проверка разделяющей способности. Требования для проверки разделяющей способности приводят в соответствующих частных статьях.

Проверка чувствительности. Чувствительность считается удовлетворительной, если пятно или полоса четко обнаруживаются на хроматограмме, полученной с наиболее разбавленным раствором сравнения.

Методика. Если нет других указаний в частной статье, хроматографическое разделение выполняют восходящим способом в насыщенной атмосфере.

Предпочтительнее использовать такие подвижные фазы, которые обеспечивают величины R_f испытуемых соединений в пределах от 0,3 до 0,7.

Если нет других указаний в частной статье, пятна или полосы наносят на расстоянии не менее 15 мм от нижнего края и не менее 10 мм от боковых краев пластинки.

Слой жидкости в хроматографической камере должен быть таким, чтобы после помещения в него пластинки пятна или полосы находились над уровнем жидкости.

Если условия насыщения хроматографической камеры, нанесения пятен или хроматографирования отличаются от указанных выше, они должны быть описаны в частной статье.