1. Установить подлинность лекарственных препаратов

а) кислота фолиевая:

1. растворяют 0,01 г препарата в 5 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия, приливают 5 мл 0,1 М раствора хлороводородной кислоты и 1 мл раствора перманганата калия. Раствор помещают на 3 мин в водяную баню с температурой 80-85 ^оС. После охлаждения прибавляют по каплям 0,2 мл раствора пероксида водорода и фильтруют. Фильтрат имеет голубую флуоресценцию в УФ свете.

2. раствор 0,001 %-ного препарата в 0,1 М растворе гидроксида натрия имеет максимумы поглощения при 256, 283 и 365 нм. Отношение оптических плотностей при 256 и 365 нм составляет 2,8-3,0.

3. 0,01 г препарата взбалтывают с 1-1,5 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия в течение 2-3 мин и фильтруют; по 1-2 капли фильтрата переносят на часовое стекло и прибавляют 1 каплю раствора соли тяжелого металла. При этом образуются окрашенные осадки: со свинца ацетатом – лимонно-желтый; с меди (II) сульфатом – зеленый; серебра нитратом – желто-оранжевый: кобальта нитратом – темно-желтый; железа (III) хлоридом – красно-желтый.

б) метотрексат:

1. регистрируют УФ спектр 0,001 %-ного раствора препарата в 0,1 М растворе натрия гидроксида (l_max при 258, 303 и 370 нм);

2. 0,01 мл (100 мкг) 1 %-ного раствора препарата в 0,05 М растворе карбоната натрия при помощи микропипетки или капилляра хроматографируют на полоске Ленинградской бумаги (марки «С», 6 ´30 см) восходящим методом до распространения фронта растворителя (фосфатного буфера) на 23-25 см (3-3,5 ч). Хроматограмму вынимают из камеры, сушат и просматривают в УФ свете при длине волны 253 нм. НА хроматграмме должно быть одно пятно с R_f 0,65-0,75 (метотрексат) и не более трех флюоресцирующих пяте (птеридин).

в) рибофлавин:

1. растворяют 1 мг препарата в 100 мл воды. Раствор имеет яркую зеленовато-желтую окраску при дневном свете и зеленую флюоресценцию при облучении ультрафиолетовым светом. Флюоресценция исчезает при добавлении растворов кислот или щелочей, а под действием гидросульфита натрия [пентаоксодисульфата (IV) натрия] пропадает и флюоресценция, и зеленая окраска раствора;

2. образование с солями металлов нерастворимых интенсивно окрашенных комплексов (Ag⁺, Hg⁺, Cu²⁺, Fe²⁺, Co²⁺ и др.): к 2 мл 0,1 %-ного раствора рибофлавина прибавляют 1 мл 2 %-ного раствора нитрата серебра, появляется оранжевое окрашивание, переходящее со временем в красное.

2. Провести определение чистоты лекарственных препаратов

а) кислота фолиевая:

потеря в массе при высушивании: около 0,5 г препарата (точная масса) сушат до постоянной массы в вакууме при 110 ^оС и остаточном давлении 2·10³-2,6·10³ Па (15-20 мм рт. ст.). Потеря в массе не должна превышать 8,5 %.

б) метотрексат

Вода: около 0,05 г препарата (точная навеска) титруют реактивом Фишера с титром 1-1,2 мг воды на 1 мл. Конец титрования определяют электрометрически. Воды в препарате должно быть не более 10,00 %.

б) рибофлавин:

удельное вращение: от -110 ^о до -130 ^о. Около 0,1 г препарата (точная масса) растворяют в 4 мл 0,1 М спиртового раствора гидроксида калия и доводят свежепрокипяченной и охлажденной водой до 20 мл. Определение проводят не позже чем через 30 мин после приготовления раствора.

Удельное вращение рассчитывают по формуле:

[α]_D²⁰ = (α·100)/(l·C),

где α – измеренный угол вращения, град; l – длина рабочего слоя жидкости, дм; C – концентрация раствора, г на 100 мл раствора;

потеря в массе при высушивании: около 0,5 г препарата (точная масса) сушат при 100-105 ^оС до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 1,5 %.