1. Тиамина хлорид (бромид)

- Растворяют 0,05 г препарата в 25 мл воды. К 5 мл раствора приливают 1 мл раствора гексацианоферрата (III) калия, 1 мл раствора гидроксида натрия, 5 мл бутанола или изоамилового спирта, хорошо встряхивают и дают отстояться. В верхнем слое возникает синяя флюоресценция, наблюдаемая в УФ свете. Флюоресценция исчезает при подкислении и вновь возникает при подщелачивании раствора.

- 5 мл того же раствора (см. выше) тиамина хлорида дает реакцию на хлорид-ион.

2. Тиамина бромид

- Для отличия тиамина бромида от тиамина хлорида к 5 мл того же раствора (см. выше) добавляют по 1 мл хлороводородной кислоты, раствора хлорамина, хлороформа и взбалтывают. В хлороформном слое появляется желтое окрашивание. Тиамина хлорид этой реакции не дает.

- К раствору препарата (0,1:100), подкисленному разведенной азотной кислотой, прибавляют несколько капель раствора нитрата серебра, образуется желтоватый творожистый осадок.

б) коферментов

1. Кокарбоксилазы гидрохлорид и бенфотиамин

- По УФ спектрам: раствор бенфотиамина в фосфатном буферном растворе (рН 4,9-5,1) в области 210-380 нм имееь максимум поглощения при 244 нм, минимум – при 255 нм и точки перегиба в пределах 262 и 273 нм. Водный 0,002 %-ный раствор кокарбоксилазы гидрохлорида имеет максимум поглощения при246 нм и плечо в интервале 255-268 нм..

- Подлинность также подтверждают с помощью реакций на органически связанный фосфор: бенфотиамин и кокарбоксилазы гидрохлорид предварительно гидролизуют в течение 5 мин в концентрированной азотной кислоте до образования фосфат-ионов. В качестве реактива на фосфат-ионы используют раствор молибдата аммония, с которым образуется желтый кристаллический осадок.

Задание 2 – Определить чистоту лекарственных препаратов:

а) витаминов группы В₁ - тиамина хлорид и тиамина бромид

- Прозрачность и цветность: раствор 0,25 г тиамина хлорида в 5 мл воды должен быть прозрачным и бесцветным, а раствор 0,6 г тиамина бромида в 10 мл воды должен быть бесцветным и по мутности не должен превышать эталон № 4.

- Кислотность водных растворов: для тиамина хлорида рН 2,5-3,4 (5 %-ный раствор), для тиамина бромида рН 2,7-3,4 (6 %-ный раствор).

- Тиамин: растворяют 0,2 г тиамина хлорида в 5 мл воды, прибавляют 1 мл разведенной хлороводородной кислоты, 0,3 мл пергидроля, 1 мл раствора хлорида бария; не должно появляться желтое окрашивание и возникать помутнение раствора (для тиамина бромида испытание не проводится).

- Потеря в массе при высушивании: около 0,5 г тиамина хлорида (точная навеска) сушат при 100-105 ^оС до постоянной массы, потеря которой не должна превышать 5 % (для тиамина бромида не проводится).

б) коферментов – кокарбоксилазы гидрохлорид и бенфотиамина

Основными испытаниями на наличие специфических примесей является установление содержания фосфотиамина в кокарбоксилазе и бенфотиамине (соответственно 3 и 1 %).

Задание 3 – Выполнить количественное определение лекарственных препаратов:

а) витаминов группы В₁

1. тиамина хлорид: около 0,1 г препарата (точная навеска) растворяют в 20 мл безводной уксусной кислоты при слабом нагревании. Раствор охлаждают, прибавляют 5 мл раствора ацетата ртути (II) и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты до изумрудно-зеленой окраски (индикатор – кристаллический фиолетовый). Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора кислоты хлорной соответствует 0,01685 г тиамина хлорида, которого в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 98,0 %.

2. тиамина бромид: около 0,3 г препарата (точная навеска) растворяют в 30 мл воды ит титруют 0,1 М раствором гидроксида натрия до голубовато-зеленого окрашивания (индикатор –бромтимоловый синий). Раствор после титрования подкисляют азотной кислотой, прибавляют 1 мл раствора роданида аммония и титруют 0,1 М раствором нитрата серебра до исчезновения окраски. Из количества миллилитров 0,1 М раствора нитрата серебра, израсходованного при последнем титровании, вычитают 0,1 мл 0,1М раствора роданида аммония и количество миллилитров 0,1 М раствора гидроксида натрия, израсходованное на первое титрование. Полученную разность рассчитывают на тиамина бромид.

0,1 мл 0,1 М раствора нитрата серебра соответствует 0,04352 г тиамина бромида, которого в препарате должно быть не менее 98,0 %.

б) коферментов