Методические рекомендации для занятий (практические, семинарские, лабораторные)

Тема 2-3 - Решение многоуровневой ситуационной задачи:

- выполнение предварительных испытаний анализируемой пробы;  

- пробоподготовка;

- проведение химико-токсикологического исследования.

Цель: усвоение студентами схемы химико-токсикологического исследования при острых отравлениях.

Задачи обучения: научиться сбору информационного материала по ситуационной задаче и составлению схемы химико-токсикологической экспертизы.

Форма проведения: групповое обсуждение теоретического материала и выполнение заданий парами студентов.

Задания по теме:

Задание 1 (групповое обсуждение теоретических вопросов по теме занятия)

1. Клиническая диагностика. Особенности клинико-токсикологического анализа.

2. Требования к химико-токсикологическому анализу при острых отравлениях лекарственными веществами.

3. Подготовка проб.

4. Выбор методов. Методология анализа.

5. Направленность анализа в зависимости от клинических данных.

6. Принцип рационального сочетания методов. Особенности проведения направленного анализа.

7. Скрининг-анализ. Воспроизводимость методов применительно к анализу биологических жидкостей. Количественный анализ.

8. Документация химико-токсикологического анализа. Составление заключения.

Задание 2Решение многоуровневой ситуационной задачи:

1. выполнение предварительных испытаний анализируемой пробы (см. Приложение - алгоритм решения ситуационной задачи пп. № 1,2)

2. пробоподготовка (см. Приложение - алгоритм решения ситуационной задачи пп. № 3);  

Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. - М.,"Медицина", 1994. –189с.

4. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272с.

Контрольные вопросы:

1. Клиническая диагностика. Особенности клинико-токсикологического анализа.

2. Требования к химико-токсикологическому анализу при острых отравлениях лекарственными веществами.

3. Выбор методов. Методология анализа.

4. Принцип рационального сочетания методов.

5. Документация химико-токсикологического анализа.

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. Для быстрого лабораторного определения природы токсиканта необходим первичный

клинический диагноз отравления, на основании которого можно провести направленный анализ биожидкости. Ненаправленный лабораторный поиск токсиканта с последовательным определением в биологическом материале веществ разных классов (например, барбитуратов, фенотиазинов, хлорированных углеводородов, опиатов и др.) занимает много времени, поэтому результат анализа может потерять свое клиническое значение. Чаще всего поступающие для исследования материалы не содержат указаний на направление поиска. В сопроводительных документах, как правило, пишут: «Отравление токсикантом неизвестной природы». В таком случае требуется проведение ненаправленного ХТА. Схема ХТА обычно следующая.

На догоспитальном этапе бригада скорой помощи проводит сбор вещественных доказательств отравления. Для транспортировки жидкости переливают в чистую емкость и тщательно закупоривают. Для проведения ХТА у живых лиц берут пробы мочи и промывных вод желудка при отравлении нераспознанным ядом (первая порция 200 мл). При поступлении пострадавшего в стационар до начала инфузионной терапии берут пробы крови и мочи. В стационаре врач-токсиколог на основании клинических симптомов и результатов предварительных испытаний биожидкостей и вещественных доказательств определяет направление поиска токсиканта. При химико-токсикологическом исследовании сначала анализируют пробы мочи, осуществляя некоторые частные капельные химические реакции, хроматографический скрининг щелочных, нейтральных и кислых извлечений (при определении лекарственных токсикантов), летучих веществ (при определении алкоголя и его суррогатов).

На начальном этапе ХТА изолируют токсичное вещество из биологического материала. Это достигается экстракцией органическими растворителями при различных рН, реэкстракцией, дистилляцией, сорбцией или минерализацией органической матрицы (при определении металлических ядов). Далее проводится качественное определение токсиканта химическими реакциями или инструментальными методами. Окончательный диагноз отравления ставит врач-токсиколог на основании результатов ХТА в комплексе с данными клинического обследования.

2. АЛГОРИТМ РЕШЕНИЯ СИТУАЦИОННОЙ ЗАДАЧИ

В протоколе выполнения ситуационной задачи должны быть отражены следующие вопросы.

1. Правила направления и приема объектов исследования.

1.1 Взятие и направление объектов исследования.

1.2 Прием вещественных доказательств. Регистрация.

1.3 Документация, сопровождающая вещественные доказательства; документ, служащий основанием для проведения ХТА (в частности, судебно-химической экспертизы).

1.4 Наружный осмотр упаковки, объектов исследования.

1.5 Установление наличия консервирования объектов.

1.6 Документация при проведении ХТА.

1.7 Хранение вещественных доказательств, документации.

2. Физико-химические характеристики, токсикокинетика и метаболизм анализируемых вешеств-токсикантов.

2.1. Перечень веществ, подлежащих судебно-химическому исследованию.

2.2. Природа и физико-химические характеристики токсиканта(ов)

2.3. Пути введения токсиканта(ов).

2.4. Механизмы токсичности. Уровни повреждений: молекулярный, биохимический, клеточный, тканевой, организменный.

2.5. Токсикокинетические параметры

2.6. Метаболизм.

2.7. Способы элиминирования.

НЕОХОДИМО принять решение о выборе методов анализа и способах пробоподготовки, организовать работу лаборатории, основываясь на принципах GLP.

3. Стадии пробоподготовки и составление схемы изолирования.

3.1. Предварительная обработка.

3.2. Гидролиз конъюгированных метаболитов (при необходимости).

3.3. Экстракция.

3.4. Очистка.

3.5. Дериватизация (при необходимости).

4. Методы химико-токсикологического анализа.

Таблица предусматривает методы анализа для различных групп токсикантов. Однако при необходимости проводить исследование на элементный сослав токсикантов, следует добавить в категорию «А» методы элементного анализа: ИСП-МС, АЭС-ИСП, РФА, ААС, НАА.

Категория А	Категория В	Категория С
Масс спектрометрия	Тонкослойная хроматография	Цветные тесты
ИК спектроскопия	Микрокристаллические тесты	Иммунные методы
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса	Газовая хроматография	Точка плавления
	Жидкостная хроматография	Уф спектроскопия
	Спектрометрия ионной подвижности	Флуоресценция
	Капиллярньй электрофорез
	Только для конопли: ботаническое исследование (макро и микро)

Варианты использования

• А + (А или В или С).

• В + В + (В или С).

• Комбинированные методы (ГМ-МС) рассматриваются как два раздельных метода

4.1. Мегод тонкослойной хроматографии. Исследование в общих и частных системах растворил елей (КАТЕГОРИЯ В).

4.1.1. Достоинства метода. Чувствительность. Предел обнаружении.

4.1.2. Условия хромагографирования, выбор сорбента, систем раствори гелей, стандарты «метчиков», длина пробега растворителя, время насыщения камеры парами растворителя.

4.1.3. Обнаружение веществ на хромалографической пластинке.

• Выбор детектирующих реагентов.

• Значения величин КГанализируемых веществ.

• Способы проведения ТСХ-анализа.

4.1.4. Интерпретация результатов.

4.2. Иммунохимичеекие методы анализа (КАТЕГОРИЯ С).

4.2.1. Выбор метода (например, гегерогенный иммуноферментный метод или гомогенный анализ и т.д.).

4.2.2. Принципы обнаружения веществ.

4.2.3. Ложноположителылые, ложноотринагельные результаты.

4.2.4. Отбор образцов и хранение.

4.2.5. Мелодика проведения анализа.

4.2.6. Интерпретация результатов. Достоинства, недостал ки метода (чувсл ви гельносл ь, специфичность и т. п.).

5. Спектрометрия в УФ и видимой областях спектра (КАТЕГОРИЯ С).

• Определить, к какой группе относится анализируемое вещество — имеет или не имеет специфическое поглощение, изменяющееся в зависимости от рН среды.

• Привести спектральные характеристики.

• Подготовка пробы к анализу.

• Интерпретация результатов. Достоинства, недостатки метода (чувствительность, специфичность и т. п.).

6. ВЭЖХ анализ, ГХ анализ и др. методы КАТЕГОРИИ «В».

• Выбор условий разделения и (или) определения веществ.

• Определение градуировочной характеристики хроматографа (или других приборов) и пределов обнаружения анализируемых веществ.

• Подголовка биологического объекта к анализу.

• Качественный анализ биопробы.

• Количественное определение (способы расчета количественного определения).

• Интерпретация результатов. Достоинства, недостатки метода (чувствительность, специфичность и г. п.).

7. ГХМС, ИКС, ЯМР (ПМР)и др. методы КАТЕГОРИИ «А».

• Подготовка биологического обьекта к анализу.

• Качественный анализ биопробы (например, библиотека масс-спектров, ПМР спектров и др.).

• Количественное определение (способы расчета количественного определения).

• Интерпретация результатов.

8. Микрокристаллоскоиические методы (КАТЕГОРИЯ В).

9. Химические методы анализа (КАТЕГОРИЯ С).

10. Морфологические методы (КАТЕГОРИЯ В).

11. Фармакологические методы (КАТЕГОРИЯ В).

НЕОБХОДИМО обобщить и сопоставить результаты анализа, информацию о токсикокинетических и физико-химических параметрах токсиканта, клинических или патологоанагомических признаках отравления и приступить к интерпретации результатов ХТА.

12. Интерпретация результатов анализа.

13. Заключение об обнаружении и количественном содержании токсикантов в биообъектах (и вещественных доказательствах).

Подпись, число.