Тема 3-4 - Методы определения в биологических объектах пестицидов, представляющих наибольший интерес в химико-токсикологическом отношении.

Цель: Ознакомить студентов сразличными методамианализа пестицидов в биологических объектах, представляющих наибольший интерес в химико-токсикологическом отношении.

Тезисы лекции

Широкий ассортимент пестицидов, различающихся по своим свойствам, делает задачу их оп­ределения чрезвычайно сложной. С этой целью применяют иммунохимические и хроматографические методы. Объектами исследования являются различные коммерческие препараты, продукты домашнего приготовления, косметика, вода, напитки, пища, объекты окружающей среды, образцы биологических жидкостей и тканей.

Пробоподготовка.Разнообразие химических классов пестицидов и их свойств, характера объектов исследования (почва, вода, воздух, пищевые продукты, биологические образцы и т.д.), особенности методов определения влияют на выбор способа пробоподготовки.

Предварительное исследование пестицидов проводят хроматографическими методами (ТСХ и ГХ) или ИХМ. ТСХ применяют для скрининга и идентификации пестицидов в коммерческих препаратах, добавленных к напиткам или пищевым продуктам, биологических жидкостях (содержимое желудка, моча) и тканях.

Исследования образцов крови, объектов окружающей среды на наличие остаточных количеств пестицидов требуют применения более чувствительной техники ГХ. Наличие в молекулах пестицидов атомов фосфора, галогенов, сурьмы или мышьяка позволяет использовать возмож­ности селективных газохроматографических детекторов (АФД, ЭЗД, пламенно-фотометрический — ПФД), а также газохроматографических систем, способных одновременно получать сигналы от нескольких из указанных детекторов или оборудованных современными устройствами для переключения потоков между хроматографическими колонками разной полярности (многомерная хроматография).

Арбитражным методом при определении пестицидов считают ГХ-МС.

Однако с развитием аналитической техники все большее значение приобретает ВЭЖХ с масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС), особенно при определении термолабильных водорастворимых вешеств. В последние годы разрабатывается скрининговый анализ пестицидов с использованием ИХМ. Лидирующее положение среди ИХМ определения пестицидов занимает гетерогенный твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), технология ЕП5А. Метод поляризацион­ного флюоресцентного иммуноанализа (ПФИА) также успешно применяется для определения пестицидов.

Иллюстративный материал

Таблица 1Условия хроматографирования (стандартные методики США и стран Евросоюза)

п/ц	Подвижная система для пластин с силикагелем	Проявляющие реактивы
1	Хлороформ — ацетон (9:1)	Аg. RHB, DBQ и Pd
2	Хлороформ	Последовательная обработка реактивом Драгендорфа. раство­ром хлорида железа (III) и раствором йода в йодиде калия
3	Гексан — ацетон (4:1)	БРА, ИВР и ЭВО
4	Толуол — ацетон (95:5)	Аg и Рb
5	Дихлорметан	DPA
6	Этилацетат — изооктан (15:85)

Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272 с.

4. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия/ М.Д. Швайкова. - М., «Медицина», 1975.-376 с.

Контрольные вопросы (обратная связь)

1. Особенности изолирования и очистки отдельных групп пестицидов (ФОС, хлорорганические производные, производные карбаминовой кислоты и др.).

2. Методы обнаружения и количественного определения отдельных групп пестицидов (ФОС, хлорорганические производные, производные карбаминовой кислоты и др.).

3. Предварительные методы. Энзим этический метод, его значение.

4. Реакции окрашивания и их сочетание с тонкослойной хроматографией.

5. Перспективы использования газожидкостной хроматографии с селективными детекторами для определения пестицидов в биологических объектах.

Тема 5-6 - Группа веществ, изолируемых экстракцией водой в сочетании с диализом. Общая характеристика группы. Токсичность. Обоснование выбора объекта исследования. Способы определения рН среды объекта исследования. Мембранная фильтрация и диализ. Методы химико-токсикологического анализа.

Цель - Ознакомить студентов с группой веществ, изолируемых экстракцией водой в сочетании с диализом, особенностями их изолирования, анализа и токсикологического значения отдельных веществ.

Тезисы лекции

К группе веществ, изолируемых экстракцией водой в сочетании с диализом, относятся ми­неральные кислоты — серная, соляная, азотная, щелочи, водный раствор аммиака и ряд солей, из которых токсикологическое значение имеют главным образом нитрит натрия (реже нитрит калия), нитраты натрия и аммония (реже нитрат калия), хлорат калия.

Исследование биологических материалов на наличие этих веществ проводится тогда, когда предварительные испытания дают для этого основания или материалы дела указывают на возможность отравления указанными веществами.

Анионы неорганических и некоторых карбоновых кислот в биологических жидкостях и тканях в настоящее время определяют методами ГХ-ЭЗД, ГХ-ПИД, ГХ-ТИД, ВЭЖХ, ион­ной хроматографии, КЭ, ИСП-МС, флюорометрии, электрохимическими, биохимическими и другими методами. Наиболее распространенным способом анализа смеси анионов, включающей бромид-, йодид-, цианид-, роданид-, нитрит- и сульфид-ионы, в биологических жидкостях является перевод их в летучие пентафторбензильные производные, которые можно детектировать с помощью ГХ- ПИД и ГХ-ЭЗД.

Химические и биохимические методы также применимы в ряде случаев.

Объектами исследования на наличие этой группы веществ являются содержимое желудка, рвотные массы, остатки пищи, части одежды и др. При исследовании на соли к перечислен­ным объектам следует отнести также печень.

Иллюстративный материал

1. При наличии свободной серной кислоты при простой перегонке вследствие постоянного присутствия хлоридов из объекта исследования перегоняется и хлористый водород:

NaCl + H₂SO₄→НС1 + NaHSO₄.

Поэтому исследование на наличие кислот необходимо начинать с серной кислоты.

2. Основания - щелочи - NaOH, КОН и Са(ОН)₂; слабое основание -NH₄OH.

3. Для экспрессного определения в моче нитритов их превращают в нитромезитилен, который определяют на капиллярной колонке (15 мх0,55 мм) при 100—125 °С с использованием термоинного детектора (ТИД).

Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272 с.

4. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия/ М.Д. Швайкова. - М., «Медицина», 1975.-376 с.

Контрольные вопросы (обратная связь)

1. Общая характеристика веществ, изолируемых экстракцией водой в сочетании с диализом. Токсичность.

2. Обоснование выбора объекта исследования. Способы определения рН среды объекта исследования. Мембранная фильтрация и диализ.

3. Особенности изолирования, анализа и токсикологическое значение отдельных веществ, входящих в данную группу.

4. Химико-токсикологический анализ на группу

5. Документация анализа. Составление заключения.