3. Тезисы лекции

В химико-токсикологическом анализе наркотических и токсикологических веществ вызывающих токсикоманию основными биологическими объектами являются биожидкости: моча, кровь, (плазма, сыворотка), слюна, а также смывы. В крови определяют алкоголь, барбитураты, производные 1,4 – бензодиазепина, метаквалон, мепробамат, а в моче - фенотвазин, трициклические антидепрессанты, алкалоиды опия, амфетамины и другие соединения, в смывы – компоненты гашиша.

В любом виде анализа возможными источниками ошибок являются:

1) пробоотбор; 2) методы хранения; 3) приготовление образца; 4) техника эксперимента; 5) предубеждения химика токсиколога.

Правила и меры предосторожности пробоотбора. Результаты анализа зависят от многих факторов, в том числе, правильного отбора, пробы. Для каждого обследуемого необходимо указывать: возраст, пол, использование каких-либо лекарств, алкоголя, кофе, чая, курения. Эти факторы могут влиять не только на характер фоновых соединений, но и на скорость метаболизма анализируемых веществ, и в конечном счете и на концентрацию в биологических жидкостях организма.

Моча отбирается в чистый сухой флакон в количестве не менее 200 мл. Только при исследовании на наличие алкоголя достаточно 8-10 мл мочи. Флакон тотчас закрывают пробкой, которую фиксируют лейкопластырем или алюминиевым колпачком.

Важным фактором мочи, как объекта анализа является величина рН. При величинах рН ниже 6-7, с мочой более эффективно выводятся вещества основного характера, а при рН выше данного предела - вещества кислотного характера. Во время хранения рН мочи увеличивается из-за действия бактериальной флоры, выделяющей аммиак, что является нежелательным.

Рекомендуется хранить образцы мочи при пониженных температурах (при анализе очень быстро разлагающихся веществ - в замороженном виде) с добавлением антисептиков, таких как борная кислота, растворы фторида натрия и др. Однако, при этом следует учитывать их вклад в образующийся аналитический фон.

Из потенциальных эндогенных соединений необходимо учитывать присутствие низкомолекулярных продуктов метаболизма белков, аминокислот и сахаров (амина, мочевина, соли карбоновой кислоты и др.), небольших количеств пептидов и сахаров, стероидов, пигмента уробилина и др.

Кровь (плазма, сыворотка). У вновь поступивших больных кровь в случае необходимости отбирается на химико-токсикологическое исследование одновременно с мочой. Общепринятым является отбор 15-20 мл крови.

Кровь отбирается из поверхностной венычерез иглу самотеком в сухой пенициллиновый флакон, содержащий гепарин (3-5 капель на каждые 10 мл крови). Флакон закрывается стандартной резиновой пробкой, которую фиксируют лейкопластырей или алюминиевым колпачком. Содержимое флакона тотчас перемешивают. На флаконы наклеивают этикетки с указанием фамилии, имени, отчества больного, даты, времени, способа и места отбора крови.

Категорически запрещается использовать другие консерванты и стабилизаторы крови, также производить отбор крови шприцем.

Категорически запрещается обрабатывать кожные покровы в местах укола эфиром, спиртом или спиртовыми растворами. Место укола следует обрабатывать водными растворами этакридина (риванола) или фурацилина.

Если для предотвращения свертывания крови используются антикоагулянты, необходимо иметь в виду, что гепарин вытесняет мирные кислоты из мест связывания с альбумином, а ЭДТА и NaF вызывают осмотическую дегидратацию эритроцитов и разбавляют плазму, что в конечном счете будет влиять на количественное определение.

Для замедления энзиматической активности, кровь рекомендуется хранить в холодильнике в замороженной виде.

Эндогенные соединения крови: жирные кислоты, стероидные гормоны, холестерин и др.

На флакон с отобранной пробой должна быть наклеена этикетка с указанием фамилия, имени, отчества пациента, даты и времени отбора пробы.

Примечание. Только для диагностики алкогольного опьянения, возможно, отбирать I мл крови их мякоти пальца в стерильную пипетку, предварительно промытую раствором гепарина в разведении 1:10. Однако, при этом надо помнить, что в этом случае проба не является однородной, так как получается смесь венозной, артериальной а лимфатической крови. Химик-токсиколог должен помнить, что содержание токсического вещества в артериальной или венозной крови может быть различным. На наркотические вещества предпочтительнее анализировать венозную кровь.

При анализе на алкоголь, 1 мл крови, отобранной из пальца, переносят по 0,5 мл во флаконы, содержащие по 0,5 мл раствора 50% трихлоруксусной кислоты. В этих случаях исследование должно проводиться не позднее 1 часа от момента отбора пробы. В других случаях пробы должны быть заморожены.

Слюна. Отобранную пробу слюны центрифугируют и замораживают для замедления ферментативной активности.

Поскольку наркотическое вещество, находящееся в водном растворе плазмы пассивно диффунцируют в слюну, существует определенная корреляция между концентрациями наркотиков в слюне и плазме. В слюне содержатся белковые соединения (альбумины, липопротеиды и др.), которые могут принимать участие в связывании наркотических средств.

Общие правила, меры предосторожности хранения и транспортировки биологических проб. Как указывалось выше, все биологические образцы для замедления энзиматической активности необходимо хранить в холодильнике, а кровь и слюну в морозильной камере.

Чтобы уменьшить поглощение анализируемого вещества стенками стеклянной посуды, отбор и хранение проб лучше всего осуществлять. в полиэтиленовых, полипропиленовых или тефлоновых флаконах с завинчивающимися пробками из этого же полимера. В случае отсутствия таковых, хранить пробы можно в пенициллиновых склянках с резиновыми пробками, обжатыми алюминиевыми колпачками. При этом надо иметь в виду возможную потерю веществ за счет поглощения стенками стеклянной посуды и загрязнение пробы от резиновых пробок.

На всех отобранных пробах указываются фамилия, имя, отчество и возраст обследуемого, время отбора пробы, предварительный диагноз, способ отбора и номер пробы, наименование вещества, на которое необходимо произвести исследование.

Особенности анализа биообъектов на наличие наркотиков у живых лиц. Определение наркотических, психотропных и сильнодействующих веществ в биологических пробах проводят с целью установления факта их употребления. Быстро меняющаяся ситуация в области нелегального оборота наркотиков привела к резкому увеличению числа исследований наркотических и одурманивающих веществ, выполняемых в последние годы химико-токсикологическими лабораториями.

Для определения наркотических и психотропных веществ чаще всего используется моча,как наиболее информативный биообъект исследования. Образец мочи обычно может быть по­лучен в достаточном количестве, а концентрация психоактивных веществ или их метаболитов в нем, как правило, относительно высокая. К недостаткам этого биообъекта следует отнести возможность фальсификации образца. Наиболее типичные способы фальсификации: разбавление, подмена или загрязнение образца. Для установления факта употребления наркотика, спустя недели или месяцы, следует провести исследование волос и ногтей. В табл. 1 приведены данные литературы о времени возможного выявления часто используемых наркотических и психотропных веществ и некоторых их метаболитов в моче.

В соответствии с требованиями надежности, достоверности и доказательности результатов анализов, а также рекомендациями ВОЗ и об­щепринятыми мировыми стандартами, лабораторное исследование на наличие наркотических веществ должно состоять из двух этапов: предварительного (скринингового) и подтверждаю­щего.

Согласно международным правилам методы опре­деления наркотиков разделяют на 3 категории (табл. 2).

Предлагаются следующие варианты их использования:

• А + (А или В, или С);

• В + В + (В или С).

Комбинированные методы (ГХ-МС) рассматриваются как два раздельных метода.

В настоящее время наибольшее распространение в ХТА наркотических и психотропных веществ при скрининговых исследованиях получили иммунохроматографический анализ (ИХА) на тест-полосках, ПФИА и ИФА. Современные ИХМ отличаются высокой чувствительностью, простотой и экспрессностыо исполнения, одновременно позволяют анализировать большое число проб, не требуя дополнительной или специальной их очистки или концентрирования и поэтому удобны для скрининг-диагностики. При получении положительного результата, т.е. когда концентрация вещества превышает пороговую, необходимо провести дальнейшее исследование образца мочи подтверждающими альтернативными методами. При отрицательном результате проведения дальнейшего исследования не требуется.

Ограничения на применение мочи и крови в качестве объектов исследования на присутствие физиологически активных веществ в организме человека:

• быстрое разложение, как самих образцов, так и исследуемых веществ, что обусловливает необходимость проведения исследований в возможно короткие сроки после их отбора;

• сложности в интерпретации результатов при обнаружении веществ в количествах, близких к пределу их обнаружения;

• узкий временной интервал, в течение которого возможно обнаружение вещества;

• высокая вероятность ложпоположительного результата в случае случайного или предумышленного загрязнения образца.

Альтернативными объектами для определения наркотиков являются волосы, ногти и пото-жировые выделения кожи.

Необходимо проводить раздельное определение веществ, адсорбированных поверхностью этих объектов, и веществ, находящихся invivo. В случае обнаружения наркогиков на поверхности ис­следуемых объектов следует провести процедуру отмывкис обязательным контролем чистоты. Например, после употребления наркотиков их концентрация на поверхности кожи, волос и ногтей обычно составляет10^-6 — 10^-7 г, а после отмывки поверхностных загрязнений 10^-8 — 10^-11 г.

Предложены (Симонов Е.А. и др., 2000) следующая схема пробоподготовки образцов кожи, волос и ногтей и методы определения в них наркотиков (рис. 1).

Особенности анализа объектов небиологического происхождения на наличие наркотиков. Разнообразие видов и форм контролируемых веществ, а также действия их производителей (противозаконного рода деятельность), направленные на маскировку и сокрытие своей продукции, обусловливают специфические аспекты криминалистического анализа.

Для отнесения того или иного объекта к какому-либо виду наркотиков с целью установления мер контроля над его оборотом требуется проведение исследований этого объекта несколь­кими независимыми методами. По сложившейся международной и отечественной практике во многих случаях достаточно 2—3 методов. Иногда при анализе сложных смесей число методов значительно увеличивается.

Перед экспертом после отнесения им того или иного образца вещества, изъятого из незаконного оборота, к наркотическим средствам или психотропным веществам, обычно встают следующие вопросы: составлял ли ранее этот образец единую массу с другими образцами, изъятыми у данного субъекта? существует ли связь между этими образцами и каким-либо установленным дилером? если такая связь существует, то какую полезную информацию можно получить о цепи распространения наркотика на местном, региональном или международном уровне? кустарного или заводского производства данные образцы? возможно ли установить источник, в том числе регион, производства наркотика? какие методы применялись для его производства? какие реактивы и прекурсоры при этом использовались?

Для решения этих вопросов эксперт на основе исследования предоставленных образцов наркотика должен:

- установить специфические связи между образцами наркотика и сравнить их с результатами исследований поступавших ранее образцов;

- классифицировать результаты на связанные между собой группы, принимая во внимание всю совокупность образцов, имеющихся в его распоряжении.

Классификация аналитических методовбазируется на принципах обязательного получения полной информации о структуре анализируемого вещества с помощью комплекса методов и рекомендована ведущими экспертными подразделения США, Великобритании, Японии, Гер­мании и ряда других стран, а также группой экспертов ООН.