3. Тезисы лекции

Направленный химико-токсикологический анализ

производных барбитуровой кислоты

Объекты исследования: печень, почки, мозг, селезенка, содержимое желудка, кровь, моча.

Изолирование. При направленном исследовании на барбитураты используются частные методы изолирования – водой, подщелоченной гидроксидом натрия (метод П. Валова) и водой, подкисленной серной кислотой (метод В.И. Поповой).

ТСХ скрининг. При проведении анализа в общей системе растворителей ацетон-хлороформ (1:9) барбитураты находятся во второй зоне со значениями R_f 0,31-0,41. В качестве проявителя барбитуратов используют 5 % раствор сульфата ртути и 0,1 % раствор дифенилкарбазона в хлороформе. При наличии барбитуратов появляются пятна, окрашенные в сине-фиолетовый или красно-фиолетовый цвета. Затем барбитураты элюируют из слоя сорбента ацетоном и элюаты исследуют в частной системе хлороформ-н-бутанол-25% раствор аммиака (70:40:5), сорбент - силикагель КСК, забуференный 0,1 н. раствором борной кислоты. Идентификация индивидуальных барбитуратов проводится в присутствии «свидетелей».

Обнаружение. После очистки кислой хлороформной вытяжки экстракционным методом, возгонкой, хроматографическими методами проводят подтверждение наличия барбитуратов химическими и физико-химическими методами.

Реакции окрашивания:а)с аммиачным раствором нитрата или ацетата кобальта. Наблюдается фиолетовое окрашивание, обусловленное образованием внутрикомплексного соединения:

Реакция не специфична, т.к. её дают пурины, пиримидины, сульфаниламидные препараты. Выполнению этой реакции мешают вода, которая разлагает окрашенные соединения. Реакция является высокочувствительной и носит предварительный характер.

б)мурексидная проба – при наличии барбитуратов наблюдается розовое окрашивание. Реакция обладает низкой чувствительностью и неспецифична, т.к. её дают пурины, пиримидины.

Микрокристаллоскопические реакции: а)выделение кислотной формы барбитуратов – для барбитала характерны бесцветные прозрачные прямоугольные призмы; для фенобарбитала – сфероиды; для барбамила – пластины или призмы, сгруппированные в виде сфероидов; для этамина натрия – призматические кристаллы. Реакции чувствительные и специфичные. Однако необходимо учитывать возможность появления полимофных модификаций, поэтому для подтверждения наличия индивидуальных барбитуратов проводятся б)частные реакции с реактивами:

- с хлорцинкйодом (барбамил, барбитал, этаминал натрия образуют темно-красные прямоугольные пластинки);

- с железйодидным комплексом (барбамил, фенобарбитал, этаминал натрия – оранжево-коричневые или коричневые призмы и их сростки);

- с меднойодидным комплексом (барбами, этаминал натрия – призмы и их сростки);

- со спиртовым раствором йодида калия (барбитал, этаминал натрия – призмы и их сростки);

- с меднопиридиновым реактивом (барбитал – фиолетовые кристаллы в форме звездочек, друз и прямоугольников). Наличие осадка обусловлено образованием внутрикомплексного соединения:

Физико-химические методы идентификации: обнаружение по УФ- и ИК-спектрам; методы ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ.

Количественное определение проводится:

- спектральными (УФ-спектрофотометрия, фотоколориметрия, дифференциальная спектрофотометрия, экстракционная фотометрия);

- хроматографическими (ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ).

Наиболее перспективным среди перечисленных является дифференциальная спектрофотометрия основанная на имино-имидольной таутомерии барбитуратов. После измерения оптической плотности при различных значениях рН возможно нивелировать влияние примесей на полученные результаты:

C = ∆D / E^1%_1cm· 1,

где: С – концентрация барбитурата в %,

∆D разность оптических плотностей, измеренных:

- при рН 2 (примеси) и рН 10 (барбитураты в имидольной форме и примеси);

- при рН 10 и рН 13 (барбитураты в диимидольной форме),

E^1%_1cm- удельный показатель поглощения,

1 – толщина поглощающего слоя, в см.

В сочетании с предварительной хроматографической очисткой (методом ТСХ) дифференциальная спектрофотометрия обеспечивает надежные и воспроизводимые результаты количественного анализа барбитуратов.