Реакция связывания комплемента (рск)

№

Критерии оценки

1

Реакцию связывания комплемента можно применять для: 1) выявления специфических антител в неизвестной сыворотке на основании взаимодействия их с антигеном известной природы; 2) изучения свойств антигена в реакции с известной специфической сывороткой. 

2

РСК проводится в два этапа:

I-этап. Взаимодействие антигена,антитела, комплемента(эритроциты морской свинки), связывание происходит в 1-й пробирке (опыт). 2 пробирка-(КА) и 3-(КС). КА- антиген+комплемент+гемолит.система, КС- антитела+комплемент+гемолит.система

3

II-этап. Добавление гемолитической системы (гемолитическая сыворотка+эритроциты барана) для определения в каком состоянии находится комплемент (в связанном или свободном).

4

В КА и КС происходит гемолиз, т.к. в этих пробирках не образуется комплекс вследствие отсутствия одного из ингридиентов(АГ или АТ), комплемент свободный,он разрушает эритроциты. В случае положительного результата в опытной пробирке не произойдет гемолиз ввиду отсутствия свободного комплемента, т.к . комплемент сел на комплекс Аг+Ат, в случае отрицательного результата происходит гемолиз, т.к. свободный комплемент разрушает эритроциты.

5

Итого

№

Критерии оценки

1

Реакция преципитации в геле позволяет определить в исследуемом материале присутствие неизвестного  антигена путем добавления известного антитела или при помощи известного антигена — неизвестное антитело.

2

Берем чашку Петри, на середину чашки с питательным агаром кладут фильтровальную бумагу, заранее смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой.

3

С 2-х сторон от бумаги делают посев культур, выделенных от больных. Чашки помещают в термостат при t – 37^оС на 24 часа.

4

Через сутки учитывают результат:

Линии преципитации (или «усики») образуются в местах взаимодействия антитела с антигеном. Происходит реакция нейтрализации токсина антитоксином.

5

Механизм реакции: антигены и специфичные к ним антитела диффундируют в агаре друг к другу, на месте их пересечения образуются усики.

Итого

№

Критерии оценки

1

Механизм реакции: клетки культуры тканей изменяют Рн питательной среды за счет выделения кислых продуктов метаболизма, это определяется по изменению цвета индикатора фенолового красного, который входит в состав среды. В кислой среде фенолрот меняет свой цвет на желтый. При поражении клеток вирусом цвет среды- красный.

2

В 3 пробирки с вносят по 0,25 мл вируссодержащего материала.

3

Затем вносят по 0,25 мл типовых сывороток вируса полиомиелита (I,II,III) в соответствующие пробирки.

4

Сверху заливают вазелиновым маслом по 0,6 мл. На 1 ч оставляем при комн.t. Через час добавляют во все пробирки по 0,25 мл клет.культуры. Через 48-72 ч читают результат.

5

Желтый цвет приобретает лишь одна пробирка, т.к. типовая сыворотка нейтрализует лишь один тип вируса, вирус не поражает клетки, они выделяют кислые продукты, в этой же пробирке содержится тип возбудителя заболевания. В 2 пробирках цвет остается исходным красным, т.к вирус поражает клетки, они прекращают жизнедеятельность.

Итого

№

Критерии оценки

1

Метод прямой иммунофлюоресценции используют для определения антигенов: обнаружение бактерий и риккетсий в мазках, выявление вирусов в заражённых клетках, изучение клеточных антигенов,

2

Берем стекло, готовим мазок,содержащий исследуемые микроорганизмы (АГ).

3

Фиксируют его жидким фиксатором (ацетоном).

4

Обрабатывают специфической люминесцирующей сывороткой. (флюорохром+антитело)

Отмывают избыток сыворотки.

5

Высушивают препарат и рассматривают в люминесцентном микроскопе. При положительной реакции, при образовании комплекса аг+ат наблюдается свечение.

Механизм реакции: Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. 

Итого

№

Критерии оценки

1

ПЦР –это метод, который позволяет проверить генетический материал, экстрагированный из исследуемого клинического образца, на наличие в его составе участка чужеродной или измененной генетической информации и используется для получения копий непротяженных участков ДНК, специфичных для каждого конкретного наследственного или инфекционного заболевания

2

Исследуемую ДНК собирают в пробирку. Прогревают. При этом комплементарные нити ДНК разъединяются. Этот этап называется денатурацией ДНК.

3

К образовавшимся одноцепочечным ДНК присоединяют праймеры. Этот этап называется «отжигом» (присоединением).

4

Фермент полимераза достраивает комплементарные цепи ДНК. Этот этап называется «элонгация» (удлинение).

Как правило, проводится 30 циклов, что позволяет получить 2³⁰копий участка ДНК возбудителя.

5

Итого