Оценка качества сырья, содержащего флавоноиды. Методы анализа
Учитывая растворимость агликонов и гликозидов флавоноидов в спирте, проводят экстракцию флавоноидов из сырья метанолом или этанолом. Спиртовое извлечение упаривают и разбавляют водой, после охлаждения неполярные вещества (белки, жирные масла, стерины, хлорофилл) выпадают в осадок, который отделяют. Часто для удаления сопутствующих веществ сырье сначала обрабатывают хлороформом, т.е. «обезжиривают», а затем уже экстрагируют спиртом различной концентрации. Спиртовое извлечение исследуют. Проводят качественный и количественный анализ.
Качественный анализ
Для установления подлинности используют в анализе качественные реакции и хроматографическое исследование.
Качественные реакции
1. Проба Синода(проба Шинода - цианидиновая проба). Реакция основана на способности окисленных форм флавоноидов восстанавливаться водородом в момент выделения до антоцианидинов. В кислой среде образуются оксониевые соли, окраска которых зависит от структуры флавоноида. Флавоны дают оранжево-красные, флавонолы от розовой до малиновой окраски соли.
Антоцианидины, халконы и ауроны в кислой среде сразу дают окрашенные оксонизвые соли.
Эта реакция приводится в ГФХI изд. для установления подлинности цветков бессмертника песчаного.
2. Проба Брианта. Проводится в случае положительной цианидиновой пробы. Эта реакция дает возможность сделать заключение о присутствии в сырье гликозидов и агликонов. В пробирку, где проводилась проба Синода добавляют октанол и встряхивают;
если окраска перешла в октанол, то в сырье содержатся только агликоны, которые растворимы в октаноле;
если окраска осталась в водной фазе - в сырье только гликозиды;
если окрасились оба слоя - в сырье присутствуют флавоноиды как в виде гликозидов, так и в виде агликонов.
Реакция с 2%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида. Образуются хелатные комплексы за счет водородных связей, возникающих между карбонильной и оксигруппой, желтого цвета с желто-зеленой флюоресценцией. Эта реакция приведена в ГФ XI изд. для подтверждения подлинности сырья зверобоя, горца перечного и птичьего. Аналогично образуются комплексы ссолями циркония.
Реакция с 1%-ным раствором основного ацетата свинца, Антоцианы дают синий аморфный осадок, частично растворимый в кислотах, при этом раствор приобретает розовую или красную окраску (плоды черники).
Реакция с 10%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида. Антоцианы образуют соли оливково-зеленого цвета (плоды черники).
Реакция с 5%-ным раствором аммония гидроксида. Флавоноиды цветков липы образуют феноляты интенсивно желтого цвета.
Реакция азосочетанш с диазосоединениями (диазотированный стрептоцид).Образуется азокраситель оранжевого, красного или вишнево-красного цвета. Используют для количественного определения флавоноидов в листьях вахты трехлистной.
Борно-лионная реакция с реактивом Вильсона (по 0,5 г борной и лимонной кислот в метаноле). Реакция отличия флавоноидов от фуранохромонов, Флавоноиды дают комплексы с борной кислотой желтой окраски с ярко-желтой флюоресценцией, которые не разрушаются лимонной кислотой.