1. Реакция образования антрахинолятов со щелочью.

Может быть проведена в трех вариантах:

а) на сухом сырье - при нанесении нескольких капель 10%-ного раствора натрия гидроксида на сырье появляется вишнево-красное пятно.

Положительный результат наблюдается, если АЛ присутствуют в окисленной форме. Рекомендована ГФ-XI для подтверждения подлинности Cortex Frangulae;

б) с водным извлечением (1:10) - при добавлении к водному извлечениюиз сырья нескольких капель 10%-ного раствора щелочи образуется вишнево-красное окрашивание;

в) реакция Борнтрегера. Позволяет обнаружить эмодины в присутствиидругих АП.

Проба основана на способности антрагликозидов подвергаться щелочному гидролизу с образованием свободных агликонов. Одновременно происходит окисление восстановленных форм. После подкисления гидролизата агликоны извлекают эфиром. Эфирный слой окрашивается в желтый цвет. При встряхивании эфирного слоя с аммиаком эмодины, имеющие гидроксильные группы в бета-положении, переходят в водный слой, окрашивая его в вишнево-красный цвет. Хризофанол остается в органическом слое, окрашивая его в желтый цвет.

Предложена в ГФ-XI для подтверждения подлинности Cortex Frangulae, Folia Sennae, Fructus Rhamni catharticae, Radices Rhei, Rhizomata et radices Rubiae.

2. Реакция микросублимации (микровозгонки).

Основана на способности АП возгоняться при 200°С с последующей конденсацией на холодной поверхности без изменения основной структуры. Может быть проведена в двух вариантах: в пробирке и на предметном стекле. При нанесении на сублимат раствора натрия гидроксида образуется вишнево-красное окрашивание.

Дана в ГФ-XI для подтверждения подлинности Cortex Frangulae.

3.Реакция образования лаков.

Основана на способности АП образовывать со спиртовым раствором магния ацетата комплексы, окрашенные в вишнево-красный цвет.

Хроматографическое исследование

Для идентификации АП в лекарственном растительном сырье используют бумажную хроматографию и в тонком слое сорбента. Обнаруживают АП по характерной флюоресценции в Уф-свете.

Количественное определение.

Все методы количественного определения АП в сырье основаны на определении свободных агликонов после кислотного гидролиза. Агликоны экстрагируют в органический растворитель и определяют различными методами.

1. Фотоэлектроколориметрический метод.

Основан на способности окрашенных антрахинолятов поглощать немонохроматических свет при длине волны 530-540 нм.

Предложен в 1957 г. Аутергофом (Германия), модифицирован А.С. Романовой и А.И.Баньковским (НПО «ВИЛАР», 1965).

Аутергоф предложил гидролиз и экстракцию агликонов объединить в одну стадию кипячением навески сырья с ледяной уксусной кислотой и последующей экстракцией диэтиловым эфиром.

Стадии определения суммы производных антрацена:

1. стадия. Гидролиз АП и экстракция агликонов из сырья.

2. сталия. Получение окрашенных солей.

Эфирное извлечение обрабатывают в делительной воронке отдельными порциями щелочно-аммиачного раствора (5% раствор NaOH, содержащий 2% раствора NH4OH). АП в виде окрашенных антрахинолятов переходят в водную фазу; обрабатывают до тех пор, пока последняя порция щелочно-аммиачного раствора не будет оставаться бесцветной.

3стадия. Окисление восстановленных форм АП.

Для перевода всех форм АП в окисленные, часть щелочно-аммиачного раствора антрахинолятов нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Восстановленные формы окисляются кислородом воздуха и вступают в реакцию со щелочно-аммиачным раствором, окраска становится интенсивнее (сырье крушины и ревеня). В сырье марены красильной окисление восстановленных форм проводят пергидролем.

4стадия. Измерение оптической плотности окрашенных антрахинолятов с помощью фотоэлекгроколориметра (ФЭК) при длине волны 530-540 нм (зеленыйсветофильтр).

Содержание АП в сырье (%) рассчитывают по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду (СоСЬ), в пересчете на истизин.

Фотоэлектроколориметрический метод рекомендован ГФ-XI для определения содержания (%) АП в сырье крушины, ревеня, марены красильной.

В корневищах и корнях марены красильной по ФС регламентируется содержание связанных производных антрацена. Количественное содержание связанных производных антрацена определяют вычитанием количества свободных производных антрацена (агликонов) из суммы производных антрацена. Количественное определение суммы производных антрацена в сырье марены красильной см.выше. При определение свободных производных антрацена отсутствует стадия гидролиза антрагликозидов. Агликоны извлекают из сырья эфиром, получают окрашенные антрахиноляты, окисляют восстановленные формы пергидролем, определяют оптическую плотность окрашенных антрахинолятов и по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду рассчитывают содержание свободных производных антрацена в сырье марены красильной.

2. Спектрофотометрический метод.

Этим методом определяют содержание АП в листьях сенны. Имеются особенности из-за структуры действующих веществ:

• экстракцию сеннозидов проводят водой при нагревании;

• водное извлечение очищают от смолистых веществ;

• окисление восстановленных форм проводят с помощью FeCb;

• гидролиз гликозидов антрахинонов проводят 50%-ным раствором сернойкислоты;

• оптическую плотность окрашенных антрахинолятов измеряют с помощьюспектрофотометра при длине волны 523 им;

• содержание суммы АП в пересчете на хризофанол вычисляют по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду.