Задача №47

При определении глюкозы глюкозооксидазным методом, после добавления всех реагентов и инкубации проб, растворы в пробирках окрасились неоднородно: верхний слой оказался менее окрашенным, чем нижний.

Задания

1. Проанализируйте и объясните причину создавшейся ситуации.

2. Расскажите принцип определения глюкозы глюкозооксидазным методом и назовите реактивы, входящие в состав рабочего реагента.

3. Расскажите, какие исследования крови и мочи проводят для оценки состояния углеводного обмена.

4. Назовите преимущества определения гликозилированного гемоглобина.

Эталоны ответов к задаче № 47

1. Пробы не были перемешаны, что может привести к заниженным результатам. После добавления реагента пробы необходимо тщательно перемешивать. Процесс перемешивания обеспечивает полное взаимодействие всех компонентов реакции, получение стабильной окраски и адекватных результатов.

2. Глюкоза окисляется О₂ воздуха при каталитическом действии глюкозооксидазы с образованием глюконата и Н₂О_2. Образовавшаяся Н₂О_2, окисляет 4-ААР с фенольным реагентом при каталитическом действии пероксидазы с образованием окрашенного хинонимина. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации глюкозы.

3. Для оценки состояния углеводного обмена проводят определение концентрации глюкозы в крови и в моче, лактата, пирувата, активности ферментов, участвующих в углеводном обмене, кетоновых тел, гликозилированного гемоглобина, а также проводят тесты толерантности к различным углеводам.

4. Гликозилированный гемоглобин является показателем уровня гликемии за три месяца предшествующих исследованию. Его уровень не зависит от времени суток, физических нагрузок, приема пищи, эмоционального состояния, назначенных лекарств.

Задача № 48

В лабораторию для биохимических исследований поступила кровь группы больных. После центрифугирования крови и отделения сыворотки от сгустка несколько образцов сыворотки оказались мутными.

Задания

1. Назовите основные классы липопротеинов плазмы (сыворотки).

2. Скажите, как называется мутная сыворотка и с чем связано её помутнение.

3. Объясните, какие действия должен предпринять лаборант для исследования такой сыворотки.

4. Расскажите, какие исследования проводят для выяснения типа гиперлипопротеинемии.

Эталоны ответов к задаче № 48

1. Хиломикроны - ХМ, липопротеины очень низкой плотности - ЛПОНП, липопротеины низкой плотности - ЛПНП, липопротеины промежуточной плотности - ЛППП, липопротеины высокой плотности – ЛПВП.

2. Мутная сыворотка называется «липемичная» или «хилёзная». Такая сыворотка получается либо при нарушении правил взятия крови, если кровь берут не натощак, после приёма жирной пищи, либо при наличии гиперлипопротеинемии у пациента. Хилёзная сыворотка содержит большое количество хиломикронов.

3. «Хилёзную» сыворотку (или плазму) перед исследованием надо осветлить, оставив на 8-10 часов в холодильнике. Хиломикроны всплывут на поверхность в виде сливкообразного слоя и этот слой можно удалить. В случае, если надо исследовать липидный спектр, то сыворотку не осветляют.

4. Определить ТАГ, общий холестерин, ХС-ЛПВП, ХС-ЛПВП, рассчитать ИА (индекс атерогенности). В случае, если ТАГ более 4,5 ммоль/л, то рассчитывать ХС-ЛПНП по формуле нельзя, надо выделить отдельные классы липопротеинов, определить в каждом классе ХС, ТАГ, а затем по классификации Фредриксона определить типирование гиперлипопротеинемий.

Задача № 50

Во время заполнения колонки для проведения обессоливания белкового раствора методом гель - фильтрации, гель в колонке лёг слоями, в нём появились трещины и пузырьки воздуха.

Задания

1. Расскажите алгоритм заполнения колонки гелем.

2. Объясните, к каким последствиям приведёт такое заполнение колонки.

3. Назовите реакцию с помощью которой можно обнаружить белок в собранных фракциях.

4. Объясните, почему при обессоливании белковых растворов методом гель - фильтрации белок по времени появляется в элюирующей жидкости раньше, чем ионы соли?

Эталон ответа к задаче № 50

1. Колонку закрепляют в штатив строго вертикально,

в колонку с закрытым краном наливают небольшое

количество дистиллированной воды,

на дно помещают кусочек стеклянной ваты, избегая

попадания пузырьков воздуха,

в колонку через воронку наливают густую суспензию геля сефадекса,

следя за тем, чтобы гель оседал равномерно, не образуя слоёв.

2. Не произойдет четкого разделения белка и соли

3. С помощью биуретового реактива.

4. Белок проходит между гранулами сефадекса, а соль задерживается в гранулах сефадекса.