Задача № 1

Пациенту назначено исследование ферментов: АлТ, АсТ, ЛДГ, кислой фосфатазы (КФ). Сыворотка оказалась гемолизированной.

Задания

1. Назовите источники аналитических ошибок при определении активности ферментов.

2. Расскажите особенности подготовки биологического материала для ферментативных исследований.

3. Объясните, какие действия должен предпринять лаборант в случае с гемолизированной сывороткой.

4. Расскажите принцип метода Райтмана - Френкеля определения АЛТ по конечной точке.

Эталон ответа к задаче № 1

1. Для получения надежных результатов при исследовании ферментов требуется правильно проводить взятие крови и получение сыворотки (плазмы); соблюдать, чтобы рН буферного раствора, концентрация субстратов и коферментов, температура в ходе инкубации были оптимальными; строго соблюдать время проведения реакции; нельзя использовать просроченные реактивы. Несоблюдение перечисленных параметров является источником грубых аналитических ошибок. Гемолизированную сыворотку использовать для определения активности ферментов нельзя, т.к. следы гемолиза влияют на результаты исследования в связи с дополнительным выбросом ферментов из эритроцитов.

2. При работе с ферментами сыворотку необходимо как можно быстрее отделить от эритроцитов, избегать нагревания, повторного замораживания и оттаивания, исследовать не откладывая. Взятие крови для исследования ферментов нужно проводить натощак. Лекарственные препараты, принятые больными, влияют на активность ферментов.

3. В регистрационном журнале лаборант должен записать, что «сыворотка гемолизированная, анализ надо повторить» и сообщить в отделение, откуда доставлен биоматериал.

4. При каталитическом действии АЛТ в результате реакции переаминирования аланин превращается в пировиноградную кислоту (ПВК). При добавлении к ПВК 2,4-ДНФГ (динитрофенилгидразина) реакция останавливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты, который в щелочной среде даёт коричневое окрашивание. Интенсивность окраски прямо пропорциональна активности АЛТ.

Задача № 2

У обследуемого пациента после проведения глюкозо - толерантного теста получены следующие показатели глюкозы в сыворотке:

натощак- 6,8 ммоль/л,

через 1час после сахарной нагрузки- 12,9 ммоль/л,

через 2часа после сахарной нагрузки- 11,2 ммоль/л,

через 3 часа после сахарной нагрузки- 10,1 ммоль/л.

Задания

1. Оцените результаты и сделайте заключение о толерантности к глюкозе у обследуемого пациента.

2. Расскажите алгоритм проведения глюкозо - толерантного теста (ГТТ).

3. Почему при проведении сахарной нагрузки необходимо неоднократно измерять содержание глюкозы?

4. Назовите противопоказания для проведения ГТТ.

Эталон ответа к задаче № 2

1. У обследуемого пациента толерантность к глюкозе снижена.

2. ГТТ проводится следующим образом: у обследуемого натощак берут кровь из пальца и определяют в ней концентрацию глюкозы, затем пациенту дают выпить раствор глюкозы (50-75 г. глюкозы в зависимости от массы тела на 250 мл H₂O).Через каждый час в течение 3-х часов определяют концентрацию глюкозы в крови. По полученным данным строят гликемическую кривую: проводят оси координат, откладывают на оси Y – концентрацию глюкозы, на оси Х – время взятия крови, находят точки пересечения и соединяют полученные точки.

3. Неоднократное измерение глюкозы необходимо для того, чтобы знать быстроту, высоту подъёма, продолжительность гипергликемии и характер её снижения в ответ на введённую глюкозу. Замедленное возвращение глюкозы к исходному уровню показывает, что нарушена секреция инсулина в ответ на введённую глюкозу.

4. Умеренная гипергликемия натощак, сахарный диабет. При панкреатите раствор глюкозы вводят внутривенно.

Задача №3

В аналитической характеристике к набору для определения общего белка биуретовым методом указано, что линейность метода сохраняется до 120 г/л. На калибровочном графике это соответствует экстинции - 0,397. Экстинция одной из опытных проб составила – 0,418.