- •Лекция №22 Тема: «Окраска бактерий и гистохимические методы исследований»
- •Патогенетическая роль хеликобактера в развитии гастритов, язв желудка и двенадцатиперстной кишки.
- •Морфологические свойства
- •Эпидемиология хеликобактерной инфекции.
- •Характеристика заболевания
- •Роль гистологических исследований в диагностике хеликобактерной инфекции.
- •Методика окрашивания гастробиопсий азуром на Хеликобактер пилори
- •Понятие об амилоидозе внутренних органов, макроскопическая характеристика пораженных органов
- •Гистологическая диагностика амилоидоза
- •Микроскопическая характеристика амилоидоза
- •Методика окрашивания на амилоид красным конго
- •Характеристика гистохимических методов
- •Общие принципы, лежащие в основе гистохимических реакций
- •Примеры гистохимических реакций
- •Гитохимия ферментов
- •Выявление гидролаз
- •Выявление окислительно-восстановительных ферментов
- •Выявление полисахаридов (кислых и нейтральных)
- •Методика проведения реакции Шифф-йодная кислота (Шик-реакция)
- •Рабочие растворы
- •Методика окрашивания
Методика окрашивания
Срезы толщиной 5—7 мкм депарафинировать и довести до воды.
Погрузить в раствор йодной кислоты на 5—10 мин или перйодата натрия либо калия на 20—30 мин.
Тщательно промыть в двух—трех порциях дистиллированной воды (по 3—5 мин), чтобы удалить остаток йодной кислоты.
Поместить в реактив Шиффа на 10—20 мин.
Обработать в трех порциях свежеприготовленной сернистой воды (по 1—2 мин).
Промыть в водопроводной воде в течение 10 мин, ополоснуть в дистиллированной.
Обезводить, просветлить и заключить в бальзам (если нужно окрасить ядра, то после шестого этапа производят докрашивание срезов гематоксилином).
Результат. Вещество полисахаридной природы окрашено в пурпурно- или лилово-красный цвет. Нейтральные мукополисахариды бывают обычно пурпурно-красными, гликоген — более темный.
Примечание. Обработку реактивом Шиффа следует проводить в хорошо закрывающихся биологических стаканчиках, обернутых в черную бумагу. Одну порцию реактива можно применять многократно (до появления красноватой окраски).
Если на срезах появляются грязно-коричневые пятна, это свидетельствует о том, что окисляющий раствор не был полностью промыт перед обработкой срезов реактивом Шиффа.
ШИК-положительную реакцию, помимо гликогена, дает группа веществ полисахаридной природы —гликолипиды, гликопротеиды, мукопротеиды, а также некоторые вещества, не содержащие углеводов: фосфолипиды, липопротеи-ды и некоторые липиды. Поэтому, для того чтобы определить, какое из веществ присутствует в исследуемых тканях в каждом конкретном случае, необходимо провести дополнительные реакции для уточнения ШИК-положительных веществ. Например, если на одном срезе провести Шик-реакцию, а соседний срез предварительно обработать амилазой (фермент, разрушающий гликоген), а потом осуществить Шик- реакцию, то отсутствие окраски на втором срезе подтвердит специфичность реакции, то есть наличие гликогена.