Примеры гистохимических реакций

Окрашивание жиров и липидов.Термин «липиды» - собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества экстрагируемые растворителями (бензин, эфир, хлороформ). В основе окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, красящие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды. В качестве красителей используют судан III, IV, судан чёрный.Выявление белков.Белки входят в состав большинства клеточных и тканевых структур с ними связаны пластические, энергетические, транспортные и ферментные процессы. Поэтому гистохимическое выявление белков имеет важное значение для характеристики изменений, происходящих в клетках и тканях как в норме, так и в патологии.Выявление белков по методу Даниелли.Сущность этого метода состоит в том что на препараты сначала воздействует трис-диазонием розанилина (основного фуксина), реагирующего со многими аминокислотными остатками белков. Для усиления окрашивания их обрабатывают Н – кислотой, которая соединяется с реактивными группами трис- диазония, связанного с белками. Интенсивность красно-фиолетого окрашивания зависит от концентрации белков в структуре.Выявление полисахаридов.Полисахариды — высокомолекулярные сахара, встречаются в тканях организма как в чистом виде (гликоген), так и в соединении с другими веществами (мукополисахариды, мукопротеиды, гликопротеиды). Гликоген является ре­зервом сахара в организме и содержится главным образом в печени и мышцах. Мукополисахариды — это полисахариды, содержащие в качестве одного из компонентов гексозамин.Мукополисахариды подразделяют на нейтральные и кислые. Последние теперь называют гликозаминогликанами. Они распространены в животном организме очень широко, их в свою очередь делят на простые и сложные. Мукополисахариды, про­чно связанные с белком, называют мукопротеидами и гли­копротеидами. Они входят в состав слизеподобных веществ и секрета ряда желез.Полисахариды и их комплексы — весьма лабильные соединения, чутко реагирующие на разнообразные сдвиги обменных процессов в организме.Вещества полисахаридной природы играют важную роль в обеспечении нормальных физиологических процессов и занимают ведущее место в развитии ряда патологических процессов, особенно связанных с заболеванием соедини­тельной ткани.

Шик-реакция

В основе гистохимии веществ, содержащих полисахаридный компонент, лежит реакция шифф-йодная кислота (ШИК-ре­акция).С помощью этой реакции можно выявить гликогены, мукопротеиды, гликопротеиды и гликолипиды. Рабочие растворы.Реактив Шиффа. Растворяют 1 г основного фуксина в 200 мл кипящей дистиллированной воды и, периодически встряхивая сосуд с раствором, продолжают кипячение в течение 5 мин. Затем охладив содержимое до 50°С, раствор фильтруют, добавляют 20 мл 1N раствора НС1 и охлаждают до 25°С, после чего добавляют 1 г метабисульфита натрия,, или бисульфита натри и оставляют в темноте при комнатной температуре на сутки. За это время, вследствие образования фуксинсернистой кислоты раствор или совершенно обесцвечивается, или приобретает желтоватый оттенок. Если в растворе будет много желтизны, то его обесцвечивают активированным углём (через 18—24 ч в раствор всыпают 2 г активированного угля, встряхивают в течение 1 мин). Затем раствор отфильтровывают и хранят в темноте при 0—4°С в налитой до пробки посуде. Готовый реактив Шиффа бесцветен или имеет светло-желтую окраску. Покраснение раствора в про­цессе хранения свидетельствует о его разложении и непри­годности к употреблению.

Методика окрашивания.Срезы толщиной 5—7 мкм депарафинировать и дове­сти до воды.Погрузить в раствор йодной кислоты на 5—10 мин или перйодата натрия либо калия на 20—30 мин.Тщательно промыть в двух—трех порциях ди стилли­рованной воды (по 3—5 мин), чтобы удалить остаток йодной кислоты.Поместить в реактив Шиффа на 10—20 мин.Обработать в трех порциях свежеприготовленной сернистой воды (по 1—2 мин).Промыть в водопроводной воде в течение 10 мин, ополоснуть в дистиллированной.Обезводить, просветлить и заключить в бальзам (если нужно окрасить ядра, то после шестого этапа производят докрашивание срезов гематоксилином).Результат. Вещество полисахаридной природы окрашено в пурпурно- или лилово-красный цвет. Нейтраль­ные мукополисахариды бывают обычно пурпурно-красны­ми, гликоген — более темный.Примечание. Обработку реактивом Шиффа следует проводить в хорошо закрывающихся биологических стаканчиках, обернутых в черную бумагу. Одну порцию реактива можно применять многократно (до появле­ния красноватой окраски).Если на срезах появляются грязно-коричневые пятна, это свидетель­ствует о том, что окисляющий раствор не был полностью промыт перед об­работкой срезов реактивом Шиффа.