Микроскопическая характеристика амилоидоза

Амилоид представляет собой гликопротеид основным компонентом которого является фибриллярные белки.Фибриллы амилоида имеют диаметр 0,5 нм и длину 800 нм. Каждая фибрилла состоит из двух полипептидных цепе по 2,5 нм в диаметре. Фибриллярные белки амилоида синтезируются соединительнотканными клетками – амилобластами. В отличие от коллагена они богаты аминокислотой триптофаном, не содержат оксипролина и связаны с небольшим количеством нейтральных сахаров и сиаловой кислоты.Фибриллярные белки амилоида входят в сложные соединения с белками и полисахоридами (глюкопротеидами) плазмы крови, которые являются вторым обязательным компонентом амилоида. Это так называемый плазменный компонент (Р - компонент), который одинаков при всех формах амилоидоза. Роль Р – компонента в амилоидогенезе неясна.

Окраска красным конго

Широко распространенный способ. Окраска хорошо удается как после спиртовой, так и формалиновой фиксации и на любых срезах. Парафиновые срезы предварительно должны быть освобождены от парафина. Окрашенные препараты можно заключать в бальзам, в котором они хорошо сохраняются.Методика окраски.Срезы из воды переносят в 1 % водный раствор красного конго (готовят на дистиллированной воде) на 1—2—3 минуты.Промывают в водопроводной воде 1—2 минуты.Дифференцируют (в чашечке или прямо на предметном стекле) 70— 80° спиртом 1/2 —2 минуты, а иногда и больше, до тех пор, пока препарат из ярко-красного станет бледно-розовым. При резком перекрашивании приходится дифференцировать до 10— 15 минут. Дифференцировку желательно вести под контролем микроскопа.Промывают в водопроводной воде 1—2 минуты.Подкрашивают срез каким-нибудь квасцовым гематоксилином (Бемера, Эрлиха, Караци) и снова промывают в воде 2— 3 минуты.Обрабатывают 96° спиртом, просветляют в карбол-ксилоле, промывают ксилолом и заключают в бальзам.Результат: амилоид окрашивается в красный цвет.Очень хорошие результаты получаются, если срез вначале окрасить каким-либо квасцовым гематоксилином и уже после — красным конго.

Характеристика гистохимических методов

Длительное время для изучения химического состава клеток и тканей пользовались исключительно классическими биохи­мическими методами, в основе которых лежит суммарное определение химических веществ в размельченной ткани. Однако, несмотря на свои положительные качества, эти методы не обеспечивали полного представле­ния о локализации тех или иных химических веществ в различных структурных компонентах клеток и тканей и трудно было определить, к какой именно ткани относятся выявленные химические соединения. Поиски методов, с помощью которых можно было бы определять локализацию химических веществ в целостных микроструктурах органов и тканей, привели к созданию гистохимического метода, объединяющего в себе гистологи­ческий и биохимический методы.

При гистохимических реакциях неорганические и органи­ческие вещества, входящие в состав клеток, вступают в химическую реакцию с различными реактивами (красителя­ми) и образуют окрашенные продукты реакции. По степени интенсивности этих продуктов можно до некоторой степени судить и о количественном содержании химического веще­ства в той или иной структуре.Одним из ус­ловий нормального протекания гистохимических реак­ций является соответствующий уровень рН среды. Сте­пень кислотности раствора зависит от концентрации ио­нов Н⁺, а степень его щелочности — от концентрации ионов ОН. В химии принято обозначать кислотность или щелочность раствора условно, через водородный по­казатель (рН), представляющий собой логарифм концен­трации ионов Н⁺, взятый с обратным знаком. Так, при рН 7,0 концентрация ионов Н⁺ равна концентрации ио­нов ОН^- и раствор имеет нейтральную реакцию. Чем по­казатель рН меньше 7,0, тем концентрация ионов Н⁺ выше и тем больше кислотность раствора. Наоборот, чем рН больше 7,0, тем меньше ионов Н⁺ в растворе и более выражены его щелочные качества. Для окрашивания гликозаминогликанов соединительной ткани требуется кислая среда. Разные ферменты тре­буют для проявления своей активности разные значения рН. Для щелочной фосфатазы оптимальная рН — 9,0, для кислой — 5,0. Оптимальные условия для проявления активности фермента создаются введением в среду инку­бации буферных смесей с заданным значением рН. Наи­более распространенными являются фосфатный, ацетат­ный и трис-буфер. Фосфатный буфер поддерживает рН среды от 6,0 до 8,0, ацетатный – от 3,6 до 5,6, а трис-буфер – от 7,2 до 9,0. Буферные растворы могут сохраняться длительное время, но их рН перед употреблением нужно проверять. Грубая проверка может быть осуществлена с помощью индикаторной бумаги, более точная - посредством специального прибора – потенциометра (рН - метра).В основе большинства гистохимических реакций лежат общие принципы. Определенные химические группировки окрашиваются тем или иным красителем. Краситель растворяется в определенном субстрате, входящем в состав клеточных структур.Некоторые химические компоненты клеток, такие, как ДНК, полисахариды, неспособны реагировать с красителя­ми. В таких случаях прибегают к превращению их химиче­ских группировок в реакционно-активное состояние (гидро­лиз ДНК хлористоводородной кислотой, окисление полиса­харидов йодной кислотой). При этом освобождаются или создаются вновь химические группировки, которые спо­собны реагировать с соответствующими реактивами, в ре­зультате чего образуется окрашенный продукт реакции.При выявлении локализации некоторых компонентов клетки прибегают к многоступенчатым промежуточным реакциям и переводу неокрашенного продукта реакции в окрашенный.