46.Пренатальная диагностика. Методы: уз, амниоцентез, биопсия ворсин хориона. Показания к пренатальной диагностике.

Пренатальная диагностика - дородовая диагностика с целью обнаружения патологии на стадии внутриутробного развития. Позволяет обнаружить более 90 % плодов с синдромом Дауна (трисомия 21); трисомии 18 (известной как синдром Эдвардса) около 97 %, более 40 % нарушений развития сердца и др. В случае наличия у плода болезни родители при помощи врача-консультанта тщательно взвешивают возможности современной медицины и свои собственные в плане реабилитации ребёнка. В результате семья принимает решение о судьбе данного ребёнка и решает вопрос о продолжении вынашивания или о прерывании беременности. К пренатальной диагностике относится и определение отцовства на ранних сроках беременности, а также определение пола плода.

Ультразвуковое исследование используется для изучения внутренних половых органов женщины, состояния беременной матки, анатомии и мониторинга внутриутробного развития плода. Этот эффект широко применяется в акушерстве, так как звуки, идущие от матки, легко регистрируются. На ранней стадии беременности звук проходит через мочевой пузырь. Когда матка наполняется жидкостью, она сама начинает проводить звук. Положение плаценты определяется по звукам протекающей через неё крови, а через 9 — 10 недель с момента образования плода прослушивается биение его сердца. С помощью ультразвукового исследования можно также определять количество зародышей или констатировать смерть плода.

Биопсия ворсинок хориона - метод выявления некоторых врожденных дефектов на ранних стадиях беременности. Ворсинки хориона - предшественники плаценты, удерживают эмбрион на стенке матки. Эти ворсинки имеют ту же генетическую структуру, что и клетки организма ребенка. Позднее из них развивается плацента. При подозрении на внутриутробную патологию клетки хорионических ворсинок берут на анализ и изучают в лаборатории. БВХ - метод выявления наследственных заболеваний по тканям плода. Обычно эту пробу берут до 12-й недели беременности. Женщинам старше 35 лет обычно предлагается БВХ, поскольку у них выше риск родить ребенка с врожденными дефектами. На консультации обсуждаются последствия положительного результата анализа и обсуждается возможность прерывания беременности.

Амниоцентез 15-17 неделя - хромосомный анализ

- определение пола плода

- определение альфа-фетопротеина (АФП)

- обнаружение биохимических маркеров

- анализ ДНК клеток плода

47.Близнецовый метод. Типы близнецов. Диагностика зиготности близнецов. Конкордантность и дискордантность. Соотношение наследственности и среды в формировании признака.

БЛИЗНЕЦОВЫЙ МЕТОД

Сущность метода состоит в выяснении наследственной обусловленности признаков и усановления связей между генотипом и внешней средой.

Принцип применения метода заключается в сравнении монозиготных и дизиготных близнецов. Среди всех близнецов примерно 1/3 приходится на долю монозиготных и 2/3 - на долю дизиготных близнецов.

При этом вычисляются показатели соответствия (конкордантность) или несоответствия (дискордантность), а также определяется частота возникновения заболевания (признака) одновременно у обоих близнецов каждой пары. Степень конкордантности по наследственно обусловленным признакам будет выше у идентичных близнецов. Если однояйцевые близнецы (ОБ) даже в разных средах существования обнаруживают более высокую конкордантность, чем двухяйцевые (ДБ) в однотипных средах, то можно предположить, что конкордантность обусловлена генетическими, а не средовыми факторами.

Близнецовый метод имеет несколько основных направлений:

• Диагностика зиготности - изучение сходства и различия партнеров близнецовой пары по совокупности ряда признаков, изменяющихся под воздействием окружающей среды. В этом случае используется метод полисистемного сходства или подобия по внешним признакам.

• Методы экспериментального изучения:

- иммуногенетический - сравнение по антигенам, белкам сыворотки крови, гаплотипам HLA, т.е. по менделирующим признакам, которые не изменяются в течение всей жизни, несмотря ни на какие воздействия окружающей Среды;

- исследование дерматоглифики;

- изучение наследуемых способностей (например, чувство вкуса фенилтиокарбамида);

- изучение данных ЭКГ и ЭГ;

- трансплантация кожного лоскута.

• Статистическое исследование близнецовой выборки - анкетирование близнецов, которое целесообразно в популяционных исследованиях с большими выборками.

• Метод контроля по партнеру - используется только у монозиготных близнецов. При этом возможно точно оценить то или иное внешнее воздействие, если ему подвергся только один партнер (например, лекарственный препарат).

Такие исследования выгодны в экономическом плане, так как позволяют ограничивать выборку всего двумя-тремя десятками пар близнецов. В дальнейшем перспективно применение близнецового метода в сочетании с другими (цитогенетические, биохимические и др.).

48.Сцепление и локализация генов. Метод картирования, предложенный Т. Морганом.

49. Картирование генов у человека. Метод деда. Цис - и транс-фазы сцепления

Картирование генов у человека было отсрочено, так как нет возможности экспериментальных браков, потомство у человека немногочисленное.

Анализ родословной – прямой метод или метод деда, необходимым условием является знание генотипов родителей. Наиболее часто его применяли для картирования Х-хромосомы.

Г-гемофилия, Д-дальтонизм, □ – здоровые.

Зная, что Г и Д являются сцепленной с Х-хромосомой, значит, женщина является носителем Г и Д.

HD//hd – цис-положение. В этом случае кроссоверный ребенок будет Г или Д

Hd//hD – транс-фаза сцепления.Кроссоверный ребенок с Г и Д или здоров

Чтобы определить расстояние необходимо определить процент кроссоверных потомков, которые отражают это расстояние, также надо знать фазу сцепления у матери. Определить это можно по фенотипу ее отца (деда). Если у него Г или Д значит, у матери транс-фаза, если только Г – транс-фаза. Только Д – цис-фаза. Если здоров, то кроссоверных – два ребенка, а не кроссоверных – три. Берем такое количество детей, чтобы определить процент кроссоверных потомков.

50. Гибридные клетки: получение, характеристика, использование для картирования.

Гибридизация соматических клеток основана на слиянии совместно культивируемых клеток разных типов, образующих гибридные клетки со свойствами обоих родительских видов. Используются клетки от разных людей, а также от человека и других животных (мыши, крысы, морской свинки, обезьяны и т.д.). Гибридные клетки, содержащие два полных генома, при делении обычно «теряют» хромосомы одного из видов. Например, в гибридных клетках «человек — мышь» постепенно утрачиваются все хромосомы человека. Можно получать клетки с желаемым набором хромосом, что дает возможность изучать сцепление генов и их локализацию в определенных хромосомах. Можно изучать механизмы первичного действия и взаимодействия генов, регуляцию генной активности. Они позволяют судить о генной активности. Это позволяет судить о генетической гетерогенности наследственных болезней, изучать их патогенез.

В 1960 г. Дж. Барски обнаружил, что клетки двух разных видов могут сливаться в культуре, образуя гибридную клетку. Спонтанно такое слияние происходит редко, но если в культуру добавить вещество, способствующее образованию цитоплазматических мостиков (вирус Синдая), то гибридизация происходит чаще.

Синкарион содержит полный набор хромосом, но в дальнейшем хромосомы мыши полностью сохраняются, а хромосомы человека выбрасываются. Через 30 делений в культуре остаются клетки с наборами (40+1) – (40+15).

Здесь работают оба генома, таким образом, можно, сравнивая синтезируемые белки, отличить мышиные от человеческих. Таким образом, мы имеем клетки (40+1), (40+2), (40+3) и т.д. Если каждую из этих культур проанализировать, т.е. какие белки человека в ней синтезируются, то следующим шагом будет нахождение расположения этих генов в хромосоме. Чаще используют клоны.

51. Картирование генов с использованием морфологических нарушений хромосом (транслокаций и делеций).