Вопрос 18.

Указать последовательность определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных дисков и оценить результаты.

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определённые дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37С до следующего дня. По диаметру задержки зон роста культуры стафилокока судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста диаметром до 10 мм культура расценивается как малочувствительная, а свыше 10 мм- как высоко чувствительная. В том случае, если диски пропитаны разными концентрациями одного и того же антибиотика, можно установить наименьшую дозу препарата, к которой чувствительна исследуемая бактериальная культура.

Вопрос 20.

Рассчитать фагоцитарные показатели и дать оценку состоянию фагоцитарного звена иммунной защиты организма. Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток. ФАГОЦИТАРНЫЙ показатель-— число микробов, поглощенных одной фагоцитирующей клеткой. Количественную оценку фагоцитарной активности гранулоцитов и моноцитов проводят в цельной крови, в лейкоцитарной взвеси или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют частицы латекса диаметром 1.0 - 2.0 мкм, суспензию убитых нагреванием бактерий или дрожжеподобных грибов.

Фагоцитирующие клетки смешивают с объектами фагоцитоза и в соотношении 1:100 или 1:10 и инкубируют при 37° в течение ЗОмин при постоянном перемешивании. Затем пробирки центрифугируют и осадок ресуспензируют в капле сыворотки крови для приготовления мазка. В мазках, фиксированных краской Май- Грюнвальда и окрашенных по Романовскому- Гимзе, подсчитывают процент фагоцитирующих клеток - фагоцитарный показатель и среднее число частиц, поглощенных одной клеткой - фагоцитарное число. Норма: фаг. показатель 40-80% Фаг. число 1-5.

Вопрос 23.

Учесть результат реакции связывания комплемента: реакция комплемента (РСК) ставиться в две фазы: в первой фазе антиген соединяют с исследуемой сывороткой, в которой предполагают наличие антител, и добавляют комплемент, инкубируют в термостате ЗОмин или 18-20 часов в холодильнике.

Вторая фаза: добавляют гемолитическую систему (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка). После инкубации в термостате в течение ЗОмин. учитывают результат.

Про положительной РСК антител сыворотки, соединившись с антигеном, образуют иммунный комплекс, который присоединяет к себе комплемент, и гемолиза не произойдет. Если реакция отрицательная (антитела в исследуемой сыворотке нет),комплемент остается свободным, и произойдет гемолиз.

РСК применяется для серологической диагностики сифилиса, гонореи, сыпного тифа и других заболеваний.

РСК можно применить и для определения антигела, например, вируса. В этом случае в качестве антител применяется диагностическая иммунная сыворотка. В качестве комплемента для РСК применяется сыворотка крови морской свинки. Гемолитическую сыворотку получают из крови кроликов, иммунизированных эритроцитами барана.