
- •Введение
- •Глава 1. Обзор литературы
- •1.1 Эритроциты
- •1.2 Клеточная мембрана
- •1.3 Наночастицы диоксида титана
- •1.4 Атомно-силовой микроскоп
- •Глава 2. Оборудование и материалы
- •2.1. Атомно-силовой микроскоп Solver p47 Bio
- •2.2 Ультразвуковая ванна Сапфир
- •2.3 Центрифуга Minispin
- •2.4 Просвечивающий электронный микроскоп jem-1400
- •Глава 3. Теория
- •3.1 Силовае измерения на асм
- •Глава 4. Эксперемент
- •4.1 Качественное изучение взаимодействия наночастиц TiO2 и эритроцитов
- •4.1.1 Приготовление препарата эритроцитов
- •4.1.2 Получение контрольных снимков
- •4.1.3 Характеризация частиц TiO2
- •4.1.4 Взаимодействие наночастиц с клеточной мембраной.
- •4.1.4.1 Дейсевие аморфного TiO2
- •4.1.4.2 Действие частиц анатаза
- •4.2 Силовые измерения
- •Благодарности
- •Список литературы
1.4 Атомно-силовой микроскоп
Атомно-силовой микроскоп (АСМ) был изобретён в 1986 году Гердом Биннигом, Кэлвином Куэйтом и Кристофером Гербером. В основе работы АСМ лежит силовое взаимодействие между зондом и поверхностью, для регистрации которого используются специальные зондовые датчики, представляющие собой упругую консоль (кантилевер) с острым зондом на конце (Рис. 3). Сила, действующая на зонд со стороны поверхности, приводит к изгибу консоли. Регистрируя величину изгиба, можно контролировать силу взаимодействия зонда с поверхностью [6].
Рисунок 3. Схематическое изображение зондового датчика АСМ [6]. |
Оптическая система регистрации малых изгибов кантилевера (Рис. 4) состоит из полупроводникового лазера, луч которого фокусируется на зеркальной поверхности кантилевера, и разделенного на секции фотоприемника, дифференциальный ток которого усиливается и используется для определения деформации кантилевера [6].
Рис. 1. Схема оптической регистрации изгиба консоли [5]. |
В режиме получения топографического изображения исследуемой поверхности зондовый датчик сканирует заданный участок, перемещаясь при помощи прецизионных пьезо-приводов. Кроме получения топографического снимка поверхности, АСМ используется и для силовых измерений. Для того чтобы методом атомно-силовой микроскопии измерить силу взаимодействия между зондом и образцом нужно закрепить образец на жесткой подложке, после чего зонд плавно подводится к поверхности, используя только вертикальный привод. Сразу после касания зонд поднимается обратно до отрыва, при этом фиксируется изгиб кантилевера, значение которого (при известном законе, связывающем силу с отклонением балки) позволяет определить силу взаимодействия между зондом и исследуемой поверхностью (Рис. 5) [5].
Рисунок 5. Схема силового измерения [7]. |
Глава 2. Оборудование и материалы
2.1. Атомно-силовой микроскоп Solver p47 Bio
Атомно-силовой микроскоп Solver P47 Bio (NT-MDT, Россия) смонтирован на инвертированном световом микроскопе.
Основными функциональными устройствами, входящими в состав прибора, являются:
- измерительный блок:
− блок подвода и сканирования;
− измерительная головка;
− сканер;
- инвертированный световой микроскоп;
- виброизолирующий подвес;
- система управления:
− СЗМ контроллер;
− компьютер с интерфейсной платой.
Основной элемент АСМ – измерительная головка (Рис. 6). В ее нижней части находится держатель зондового датчика. Головка укомплектована двумя различными держателями. Один для проведения измерений в жидкой среде, другой для проведения измерений на воздухе (Рис. 7-8) [5]. В данной работе измерения проводились как на воздухе, так и в жидкой среде.
Рисунок 6. Измерительная головка АСМ [5].
|
Рисунок 7. Сменный держатель зондового датчика для работы в жидкости [5]. |
Рисунок 8. Сменный держатель зондового датчика для работы на воздухе[5]. |
Сканирующая измерительная головка может работать в качестве выносной измерительной головки. В этом случае образец закрепляется на лабораторном столе и головка устанавливается над образцом или прямо на образец, что позволяет исследовать образцы неограниченных размеров [5].
В настоящей работе измерительная головка использовалась в совокупности с остальными элементами. Препарат располагался на предметном столике, над ним, опирая ножки в пазы, устанавливалась измерительная головка.
Под предметным столиком расположен окуляр инверсированного светового микроскопа, который необходим для наведения зонда на интересующие участки препарата. Наведение происходит за счет передвижения столика с образцом, путем вращения двух винтов.
Блок подвода находится в нижней части станины. Он осуществляет вертикальные перемещения опоры измерительной головки.
Для увеличения разрешающей способности микроскопа, посредством изоляции от наиболее влияющих на его работу вибраций, был разработан и изготовлен виброизоляционный подвес (рис.6). Он состоит из двух колец резинового шнура, держателя шнура и металлической клетки. Данная система позволила увеличить разрешающую способность микроскопа по вертикали с 2нм до 0,15нм.
Рисунок 9. АСМ Solver P47 Bio на виброизоляционном подвесе.
Рабочий элемент АСМ – зондовый датчик. Зондовым датчиком в соответствующей технической литературе [5, 6] по атомно-силовым микроскопам называется совокупность кремниевого чипа с сформированной на нем посредством химического травления консолью. На конце консоли методами фотолитографии и химическо травления создается, собственно говоря, зонд – пирамидка высотой 14-15 мкм и характерным радиусом острия 10-50 нм [6].
Характеристики зондовых датчиков, использованных в работе, по данным компании-производителя NT-MDT указаны в таблице 1.
Таблица 1. Характеристики зондовых датчиков.
Модель |
Длина (L), мкм |
Ширина (w), мкм |
Толщина (t), мкм |
Силовая постоянная (k), Н/м |
NSG 01 |
125 ± 5 |
30 ± 5 |
1,5 ¸ 2.5 |
1,45 ¸ 15,1 |
NSG 30 |
125 ± 5 |
40 ± 5 |
3,5 ¸ 4,5 |
22 ¸ 100
|
HA_NC |
80 ± 2 |
32 ± 3 |
1,7 ¸ 1,8 |
3,5 ± 20% |
Существуют также зондовые датчики с треугольным кантилевером, образованным двумя балками, но в настоящем исследовании они не использовались.