Объекти и методы исследования
Работа выполняласьна базе кафедры микологии и фитоиммунологии ХНУ им. Каразина с 2012 по 2013 года.
Объектами исслелдования был изолят C. orbiculare, выделенный из пораженных плодов арбуза, а также проростки тыквы.
2.1. Выделение в чистую культуру и подготовка растений к инокуляции
Из пораженных образцов арбуза в чистую культуру был выделен изолят C. orbiculare. Выделений в чистую культуру проводилось с использованием стандартных микологических методов. Посев осуществлялся в чашки Петри на агаризованую питательную среду: на среду Чапека и картофельно-глюкозный агар. Культивирование проводилось при комнатной температуре (18-20⁰С) в течение 7 суток. Семена тыквы помещались в стаканчики с универсальной почвой по 2 семени в каждый и выращивали в ростовой камере при 16 часовом фотопериоде. Дальнейшие исследования с 14-ти и 16-ти дневными проростками растений тыквы, достигшие стадии двух пар листочков. Опыт проводился в 3 повторностях.
2.2 Изучение морфолого-культуральных особенностей
Для анализа морфолого-культуральных особенностей гриба были использованы среда Чапека и картофельно-глюкозный агар. Посев осуществлялся в чашки Петри при комнатной температуре (18-20⁰С) в течение 7 суток.
2.3. Инокуляция растений
А) Инокуляция стеблей
Растения инокулированы в возрасте 2 недель. Для инокуляции растений основной стебель горизонтально срезали стерильным лезвием по 5 см каждый и раскладывали на фильтровальную бумагу в чашки Петри, предварительно смоченную дистиллированной водой. Одну высечку мицелия, диаметром 5 мм, аккуратно помещали мицелием на срезанный стебель. Инокуляция растений проводилась во влажной камере в течение 10 суток. Длину поражения (в мм) на каждом растении измеряли на 4, 7, 10 сутки.
Б) Инокуляция листьев
Листья 14-ти дневных проростков тыквы аккуратно срезается стерильным лезвием у черешка и помещались на фильтровальную бумагу в чашки Петри, предварительно смоченную дистиллированной водой. На подготовленные листья осторожно помещались высечки гриба, диаметром 5 мм, мицелием вниз. Инокуляция растений проводилась в течение 10 суток и на 4, 7 и 10 сутки измеряли диаметр поражения ( в мм).
2.4. Оценка чувствительности Colletotrichum orbiculare к фунгицидам
Для оценки чувствительности гриба Colletotrichum orbiculare к фунгицидам был выбран метод бумажных дисков – фунгицид наносится на диски фильтровальной бумаги (диаметром 2 см)и далее раскладывается по центру чашек Петри, и на 10 сутки измеряется задержка роста колонии.
3. Результаты собственных исследлований
В ходе проведения исследования нами было выделено в чистую культуру изолят C. orbiculare. Выделение изолята проводилось из пораженных плодов арбуза.
3.1. Морфолого-культуралые особенности изолята
При анализе морфолого-культуральных особенностей гриба на питательных средах было установлено, что более подходящей средой средой для мицелиального роста является картофельный-глюкозный агар (КГА).
Средний рост мицелия изолята C. orbiculare после 7 дней культивирования на КГА составил 41 мм. На среде Чапека – рост составил 19 мм. Полное зарастание чашек Петри на КГА составило 14 суток, а на среде Чапека 21 сутки.
На КГА наблюдался обильный рост розового мицелия лопастной формы с довольно отчетливо заметной концентричностью, а на среде Чапека наблюдался также розовый мицелий, но без характерной концентричностью (рис 1,2).
Рис.1. На КГА Рис. 2. На Чапека
В ходе проведения исследования мы встретились с трудностью отделения изолята C. orbiculare от изолата Alternaria alternata так как оба данных изолята сплелись мицелиями и при очередной попытке отделить их друг от друга, у нас ничего не получалось. В природе данные виды совместно поражают плоды растений тыквы (рис 3).
Рис.3 Грязная культура
Выделение в чистую культуру стало возможным при заражении отрезкок механически поврежденных стебельков тыквы, на которых образовывались спороложа C. orbiculare (рис 4).
Рис. 4 Полная некротизация отрезка стебля тыквы
По результатам морфолого-культуральных исследований для дальнейшей работы будет использован картофельно-глюкозный агар.