Тандемная масс-спектрометрия (ms/ms)
Метод MS/MS основан на том, что первый анализатор масс пропускает только интересующие нас ионы, а второй – анализирует продукты диссоциации выбранных ионов.
Типичный эксперимент MS/MSможно разбить на 4 этапа:
Образование ионов;
Отбор ионов;
Диссоциация отобранных ионов;
Анализ дочерных ионов, полученных в результате диссоциации.
Эти этапы могут происходить как в пространственно разделенных отделах прибора («пространственная» MS/MS) или в одном отделе, но тогда они должны быть разделены по времени («временная» MS/MS).
Важнейшие методики ионизации в современной масс-спектрометрии
РАДИОСПЕКТРОСКОПИЯ
Интенсивное применение наиболее длинноволновой части электромагнитного спектра - микроволн и радиоволн в физико-химических исследованиях началось после открытия явлений электронного и ядерного магнитного резонанса.
Эти явления отражают взаимодействие молекулы с магнитным полем. Электронный парамагнитный резонанс (ЭПР) характеризует взаимодействие с магнитным полем магнитного момента электрона. Явление ядерного магнитного резонанса (ЯМР) отражает взаимодействие с полем магнитного момента ядра.
Оба явления основаны на эффекте Зеемана, заключающемся в расщеплении спектральных линий или уровней энергии в магнитном поле на отдельные компоненты.
ЭЛЕКТРОННЫЙ ПАРАМАГНИТНЫЙ РЕЗОНАНС (ЭПР) (Принцип метода, его возможности)
Метод ЭПР открыт в 1944 г. отечественным физиком Е.Завойским.
Спектроскопия электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) применяется для исследования парамагнитных молекул, т. е. молекул с неспаренными электронами (свободные радикалы, ион-радикалы и т. д.). В методе ЭПР регистрируется резонансное поглощение электромагнитных волн электронами (а не ядрами), имеющими нескомпенсированные магнитные моменты.
Спектр ЭПР дает в первую очередь информацию о наличии и количестве парамагнитных (свободнорадикальных) частиц в исследуемом веществе в сравнении со стандартом. Кроме того, в результате взаимодействия неспаренного электрона с соседними магнитными ядрами (1Н, l3C, l4N, 17О и др.) его резонансный сигнал расщепляется (сверхтонкое расщепление).
Следовательно, по спектрам ЭПР можно определить строение свободных радикалов, распределение в них электронной плотности и отличить их друг от друга.
В связи с малой стабильностью большинства свободных радикалов метод ЭПР незаменим при изучении радикальных реакций, например реакций окисления под действием ферментов. ЭПР также применяется для исследования структуры и конформаций различных биообъектов (ферменты, фосфолипиды т. д.). Для этого к исследуемому веществу присоединяют устойчивую радикальную частицу, называемую «спиновой меткой», вводят вещество в какую-либо биологическую систему и по спектрам ЭПР наблюдают за происходящими во времени изменениями.