4. Подсчет количества эритроцитов.

Методика: Положить стекло камеры Горяева под объектив микроскопа и рассмотреть сетку камеры под большим и малым увеличением. Накрыть камеру покровным стеклом. Налить 4 мл 3 % раствора натрия хлорида в рабочую пробирку. Протереть 96 % спиртом кожу дистальной фаланги IV пальца левой руки, проколоть ее, снять первую каплю крови сухой ватой, а потом погрузить конец микропипетки в новую каплю и набрать кровь до метки. Если набрано больше крови, то с помощью сухого ватного тампона, притрагиваясь к носику, снять излишек крови. Погрузить кончик микропипетки в 3 % раствор натрия хлорида, который налит в рабочую пробирку. Таким образом кровь будет разбавлена в 200 раз.

Осторожно встряхивая, перемешать раствор крови в пробирке, каплю раствора поместить в камеру. Для этого кончик микропипетки поставить возле покровного стекла и легонько нажать на грушу. Раствор зайдет под покровное стекло в камеру и заполнит ее. Подождать 1-2 мин, чтобы эритроциты осели на дно камеры. При малом увеличении микроскопа найти сетку камеры. Перевести микроскоп на большое увеличение и начать подсчет эритроцитов в 5 больших квадратах, которые разделенные на маленькие. Лучше всего считать эритроциты в больших квадратах, которые помещаются по диагонали поля зрения. Во время подсчета эритроцитов надо помнить правило Егорова: в маленьких квадратах считать те клетки, которые помещаются как внутри квадрата сетки, так и на его верхней и левой гранях. Это нужно для того, чтобы дважды не считать эритроциты, которые находятся на сторонах сопредельных квадратиков.

Количество эритроцитов в 1 мкл крови рассчитывают по формуле:

X = а*4000*200/80

Где X — количество эритроцитов в I мкл; а — количество эритроцитов в 80 маленьких квадратах; 80 - количество подсчитанных маленьких квадратов (5*16=80); 200 — степень разведения крови; 4000 -множитель, который приводит результат объема в 1 мкл крови, поскольку объем маленького квадратика составляет 1/4000 мм (сторона 1/20, а внутри 1/10 мм).

Практически количество эритроцитов определяют в 80 маленьких квадратах, полученный показатель умножают на 10000. Для определения количества эритроцитов полученную цифру умножают на 106.

В протоколе отобразить процесс расчета в системе СИ количества эритроцитов в 1 л крови.

5. Подсчет количества лейкоцитов

Методика: подготовить камеру Горяева для подсчета лейкоцитов (так как и для подсчета эритроцитов). В отдельную пробирку налить 0,4 мл 5% раствора уксусной кислоты, окрашенной метиленовым синим. Уксусная кислота нужна во время подсчета лейкоцитов для того, чтобы обусловить гемолиз эритроцитов, а метиленовый синий - для контрастирования ядер лейкоцитов, т.е., для удобства подсчета. Протереть кожу дистальной фаланги IV пальца раствором спирта или йода, проколоть кожу, набрать кровь с помощью резиновой груши в микропипетку до метки, если попало больше крови, надо снять ее сухой ватой, вылить ее в пробирку, тщательно перемешайте кровь в ней. Первые 2 капли раствора вылить на вату, а потом заполнить камеру так же, как и для подсчета эритроцитов.

Считать лейкоциты нужно на маленьком увеличении микроскопа в 25 больших квадратах сетки, которые не разделенные на маленькие. Для большей точности подсчет следует проводить по плоскости всей камеры руководствуются правилом Егорова.

Число лейкоцитов (а) в 25 больших квадратах подставить в формулу. В таком случае количество лейкоцитов в 1 мкл крови будет составлять: Л = а*4000*20/400

Практически количество лейкоцитов, определенных в маленьких квадратиках, умножают на 50, а для переведения в единицы СИ - Г (гига) в 1 л - полученную цифру умножают на 10.