Практична робота студентів

Переглянути демонстрацію.

Алгоритм практичної роботи

Робота 1. Замалюйте і опишіть кожну демонстрацію, проведіть у протоколі необхідні розрахунки, скористайтесь таблицями для визначення колітитру і колі індексу. По кожній демонстрації зробіть у протоколі короткий коментар та висновок.

Демонстрація

Визначення мікробного числа води відкритої водойми

1мл досліджуваної водопровідної води, води відкритих водойм (в об’ємах 1,0; 0,1; 0,01 мл;) змішуються з 15-20 мл розплавленого МПА в чашці Петрі. Після культивування при 37С воду відкритих водойм засівають паралельно на дві серії чашок, одну з яких інкубують при 20С, а другу – при 37 С. Підрахувавши кількість колоній, що виросли, рахують мікробне число води – кількість мікроорганізмів в 1 мл води.

Мембранний фільтр на середовищі Ендо з ростом кишкової палички, виділеної з води

З метою визначення колітитру і колііндексу води через мембранний фільтр №3 пропускають водопровідну воду в об’ємі 333 мл, у відповідності з методикою використання мембранних фільтрів. Фільтр кладуть на поверхню середовища Ендо в чашці Петрі. Інкубують упродовж доби при 37С і підраховують кількість колоній, типових для БГКП (бактерії групи кишкової палички). Видову ідентифікацію, лактозопозитивних бактерій, та іх належність до БГКП проводять у відповідності зі схемою приведеною в додатку. Визначають колі індекс і колі титр.

Посів водопровідної води на глюкозопептонне середовище (ГПС) для визначення колі індексу

Проводять посіви трьох об’ємів по 100 мл, трьох об’ємів по 10 мл, трьох об’ємів по 1 мл в ГПС (глюкозопептонне середовище). Посів більших об’ємів води (100 і 10 мл) проводять у концентроване середовище, що містить десятикратну концентрацію поживних речовин. Після культивування підраховують кількість мутних і забродивших проб (про бродіння судять по наявності пухирів газу в поплавках). Колітитр і колі індекс визначають по таблиці .

Таблиця – ВИЗНАЧЕННЯ ІНДЕКСУ БАКТЕРІЙ ГРУПИ КИШКОВОЇ ПАЛИЧКИ ПРИ ДОСЛІДЖЕННІ ВОДИ

Кількість позитивних результатів аналізу води з:				Колі-індекс	Колі-титр
Трьох флаконів по 100мл	Трьох пробірок по 10 мл	Трьох пробірок по 1 мл
0	0	0		Менше 3	Більше 333
0	0	1		3	333
0	1	0		3	333
1	0	0		4	250
1	0	1		7	143
1	1	0		7	143
1	1	1		11	91
1	2	0		11	91
2	0	0		9	111
2	0	1		14	72
2	1	0		15	67
2	1	0		20	50
2	2	1		21	48
2	2	0		28	86
3	0	0		23	43
3	0	1		39	26
3	0	2		64	16
3	1	0	43		23
3	1	1	75		13
3	1	2	120		8
3	2	0	93		11
3	2	1	150		7
3	2	2	210		5
3	3	0	240		4
3	3	1	460		2
3	3	2	1100		0,9
3	3	3	більше 1100		Менше 0,9

Дослідження води відкритих водойм на колітитр і колі індекс.

Посів на ГПС 100; 10; 1,0; 0,1 мл

Дослідження проводять аналогічно попередньому.

Чашка Петрі з посівом повітря на МПА

Посів проведений седиментаційним методом. 2 чашки Петрі залишили відкитими упродовж 60 хвилин. Інкубували при при 37 С 24 години. При наявності менше 250 колоній (сумарно в двох чашках) повітря вважається чистим; 250-500 колоній – середньо забрудненим ; при кількості колоній більше 500 – забрудненим.

Апарат Кротова

Представляє собою прилад, який дозволяє проводити об’ємний посів повітря (аспіраційний метод). Апарат Кротова обладнаний таким чином, що повітря з заданою швидкістю засмоктується через вузьку щілину плексигласової пластини, яка закриває чашку Петрі з поживним агаром. При цьому частинки аерозолю з мікроорганізмами, що містяться в ньому, рівномірно фіксуються по всій поверхні середовища, завдяки постійному обертанню чашки під вхідною щілиною.

Чашка Петрі з посівом повітря на кров’яний агар з генціан-фіолетовим

Посів проведений аспіраційним методом з використанням апарату Кротова. Кровяний агар з генціан-фіолетовим дозволяє виявити присутність у повітрі гемолітичних форм бактерій (стрептококів і стафілококів).

Бакпечатка одноразового застосування

Представляє собою пластикову посудину, схожу на чашку Петрі. На відміну від чашки Петрі бакпечатка закривається герметично.Одна з частин бакпечатки доверху заповнена поживним МПА. Посів проводять, відкривши бакпечатку і доторкнувшись поверхнею поживного середовища до поверхні досліджуваного об’єкту (предмети навколишнього середовища, шкіра), закривають бакпечатку і ставлять у термостат.

Середовище Козера

використовується при визначенні колітитру молока, є поживним середовищем, непридатним для росту бактерій групи кишкової палички. Про належність бактерій до ГКП свідчить відсутність росту на середовищі Козера.Середовище складається з дистильованої води, фосфату натрію, фасфату амонію, фосфату калію одно заміщеного, сульфату магнію і цитрату натрію.

Мазок з кефіру, фарбування по Граму

У полі зору видно молочнокислі стрептококи, молочнокислі палички, поодинокі дріжджі.

Визначення колітитру молока

Молоко засівають у пробірки з середовищем Кесслера: в 3 пробірки вносять по 1 мл молока, ще в 3 пробірки – по 0,1 мл молока. Посіви інкубують на протязі доби при 43*С. Далі дослідження проводять у відповідності зі схемою наведеною у додатку. Колі титр і колі індекс визначають по таблиці 5.

Таблиця 4 – ВИЗНАЧЕННЯ КОЛІТИТРУ

Пастеризованого молока, вершків, морозива, молочнокислих продуктів при засіві 6 пробірок

Кишкова паличка знайдена в наступних об’ємах, мл						Колі титр, мл
1,0	1,0	1,0	0,1	0,1	0,1
--	--	--	--	--	--	Більше 3,0
+	--	--	--	--	--	3,0
+ --	+ --	-- --	-- +	-- --	-- --	0,3
+ + +	+ + +	-- + +	+ + +	+ + +	+ -- +	Менше 0,3

Таблиця 5 – КАТЕГОРІЇ ПАСТЕРИЗОВАНОГО МОЛОКА по колітитру і мікробному числу

(ГОСТ 13277-67)

Колі титр, мл	Мікробне число	Категорії пастеризованого молока
3,0 0,3 0,3	75 000 150 000 30 000	Пляшкове “А”і в пакетах Пляшкове “Б” і в пакетах Фляжне і в цистернах
Вище ІІ, І	До 500	Дитячі молочні суміші
Кишечної палички не повинно бути	До 25 000	Сухе грудне молоко для дітей грудного віку