Определение группы крови по стандартным эритроцитам

Кровь для исследования берут без стабилизатора и проводят определение с сывороткой.

На тарелку наносят 3 большие капли сыворотки исследуемого и рядом по маленькой (приблизительно в 10 раз меньшей) капле стандартных эритроцитов 0(I), А(II) и B(III) групп. Капли смеши­вают стеклянными палочками. Отмечают время. Тарелку покачи­вают. На 4-ой минуте прибавляют физиологический раствор. Через 5 минут отмечают результат.

Стандартные эритроциты 0(I) группы с сывороткой исследуемого не должны давать агглютинации.

Если агглютинация наблюдается со стандартными эритроци­тами А(II) и В(III) групп, то испытуемая сыворотка содержит α и β агглютинины и принадлежит к 0(I) группе, Обнаружение агглютинации со стандартными эритроцитами В (III) группы и от­сутствие ее с эритроцитами 0(I) и А(II) групп наблюдаются при наличии А(II) группы, имеющей β-агглютинины. Появление агглю­тинации со стандартными эритроцитами А(II) группы при отсутст­вии ее с эритроцитами 0(I) и В(III) групп наблюдается при ис­следовании сыворотки В(III) группы, содержащей α-агглютинины. Если агглютинация не наступила во всех 3 каплях, то испытуемая сыворотка не содержит агглютининов и принадлежит к AB(IV) группе.

Определение групп крови перекрестным методом

Определение групп крови перекрестным методом производят одновременно по стандартным сывороткам и стандартными эрит­роцитам групп 0, А и В.

Согласно обозначениям, сделанным на тарелке, в первые два ряда наносят большие капли стандартных сывороток, в третий ряд – маленькие капли стандартных эритроцитов. Затем берут кровь исследуемого. Сначала отбирают сыворотку и крупными кап­лями прибавляют к стандартным эритроцитам, потом небольшие капли исследуемых эритроцитов добавляют к каплям стандартных сывороток. Все капли смешивают. К концу наблюдения прибавляют физиологический раствор и через 5 минут отмечают ре­зультат. Групповая принадлежность сыворотки испытуемой крови и ее эритроцитов должна совпадать.

Прямая проба на индивидуальную совместимость

Кровь берут из локтевой вены или из пальца в количестве не меньше 1-2 мл. Образовавшийся сгусток обводят пипеткой и кровь центрифугируют для отделения сыворотки от эритроцитов. На пластинку наносят 1-2 капли испытуемой сыворотки и добав­ляют в 10-20 раз меньшую каплю крови донора. Капли смеши­вают стеклянной палочкой, пластинку покачивают и через 5 ми­нут читают результат.

Отсутствие агглютинации указывает на совместимость крови донора и реципиента в отношении групп крови АВО.

При появлении агглютинации прибавляют каплю физиологиче­ского раствора. Если агглютинация не исчезает, то кровь донора и реципиента следует считать несовместимой.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

Определение резус-принадлежности крови основано на реакции конглютинации (агглютинации), которая происходит между эритро­цитами, содержащими резус-антигены, и антителами к резус-фак­тору.

Резус антигены Rho(D), rh'(C) и rh"(E) находятся на эритро­цитах человека. Антитела к резус-фактору могуг вырабатываться в сыворотке крови резусотрицательных лиц при введении им резус-положительной крови и при беременности резусотрицательной жен­щины резусположительным плодом, унаследовавшим резуспринадлежность от отца.

Метод конглютинации с применением желатины

Посуда и оборудование.

1. Водяная баня (46—48°) или тер­мостат.

2. Агглютинационные пробирки.

3. Водяной термометр.

4. Бутыль с нижним тубусом.

5. Песочные часы на 5 минут.

6. Штативы металлические или пластмассовые.

7. Карандаши по стеклу.

8. Пипетки.

9. Стеклянные или фарфоровые стаканы.

Реактивы.

1. Стандартные сыворотки антирезус заведомо из­вестного типа [анти- Rho(D), анти- rh'(С), анти- rh"(Е)], двух серий.

2. Стандартные эритроциты резусположительных и резусотрицательных лиц 0, А и В групп.

3. Физиологический раствор.

4. 10% раствор желатины. Желатин хранится в холодильнике при 4-8 ^оС ампулах или флаконах, предварительно простерилизованных.

Для лучшего сохранения можно добавлять консервант – сульфацил натрия (альбуцид) из расчета 100 мг альбуцида на 10 мл раствора желатины.

Перед употреблением желатин просматривают. При наличии помутнения, хлопьев или расплавления – раствор непригоден. Перед работой желатин нагревают в термостате или в воде при 40-50 ^оС.