3. Генетична трансформація клітин ссавців.

Якщо введена екзогенна генетична інформація здатна зберігатись (в інтегрованому чи автономному стані) і експресуватись в клітинах ссавців, то це може приводити до зміни не тільки генотипу, але і фенотипу клітин. Даний процес називається трансформацією. Розрізняють онкогенну (морфологічну) і генетичну (біохімічну) трансформацію клітин тварин.

Найбільший інтерес при введенні в клітини чужих генів, які часто називають трансгени, має генетична трансформація, оскільки вона не приводить до таких значних перебудов матаболізму клітини, які відбуваються при онкогенній трансформації. Це дозволяє при використанні системи генетичної трансформації одержувати більш коректні дані про механізм регуляції експресії еукаріотичних генів.

3.1. Генетична трансформація мутантних ліній.

Можливість генетичної трансформації клітин ссавців вперше продемонстрував Л.Краус у 1961 р. Він виділив ДНК з кісткового мозку людини, гомозиготного по β^А-поліпептиду гемоглобіну, і обробив цим препаратом культивуючи клітини кісткового мозку від пацієнта із серповидно-клітинною анемією (β^S). В результаті клітини людини отримали здатність продукувати крім поліпептиду β^S і поліпептид β^А. Але в даному випадку відбір клонів трансформованих клітин був значно складніший, так як для ознаки, яку розглядали, не знайдені умови селекції.

3.2. Котрансформація.

…

По аналогії із сумісною трансформацією бактеріальних клітин плазмідними ДНК знайдена подія була названа котрансформацією.

В перших експериментах (1979 р.) по котрансформації клітин ссавців в якості селективного маркера використовували ген тимідинкінази віруса простого герпеса.

3.3. Домінантні ампліфікуючі маркери генетичної трансформації.

Рецесивні маркери типу генів tk i aprt вдається використовувати лише для трансформації ліній клітин, мутантних по цих генах, що істотно зменшує кількість культур, які можна піддати вивченню. При використанні домінантних маркерів такого обмеження вже бути не повинно і трансформацію можна проводити практично на будь-якій культурі клітин.

…

3.4. Епісомні вектори генетичної трансформації.

Для введення чужих генів в клітини ссавців велику цікавість мають вектори, що поєднують в собі властивості епісомних векторів паповавірусів (див.14.1.3.) і векторів генетичної трансформації клітин по маркерах домінантного типу. Такі вектори здатні реплікуватись в клітинах, пермісивних для ліричного розвитку відповідного віруса, а наявність біохімічного селективного маркера дозволяє в простій системі відбирати клони клітин, що містять гібридні ДНК, чого не можна здійснити для звичайних епісомних векторів.

…