3. Виділення стовбурових клітин за допомогою системи магнетично-активованого клітинного сортування macs
Технологія MACS дозволяє швидко та легко виділяти необхідні типи клітин за допомогою спеціального комплексу, що складається із колоїдної суспензії нетоксичних біодеградуючих суперпарамагнітних часток, приєднаних до високоафінних моноклональних антитіл MACS MicroBeads; колонок MACS Columns, в яких відбувається розділення клітин за допомогою магнітного сепаратора MACS Separators.
Суть методу полягає у розділенні суміші клітин на фракції у магнітному полі за допомогою використання імуномагнітної мітки, специфічної для цільових клітин. Для позитивної селекції клітин, що несуть на своїй поверхні антиген CD34, до клітинної суміші додається маркер – анти-CD34 антитіло, що з’єднано з магнітною часткою. Антитіло з’єднується з антигеном надаючи, таким чином, CD34 клітині магнітного маркеру. При здійсненні процедури сепарації клітинна суміш проходить крізь колонку, розміщену у високоградієнтному магнітному полі сепаратора (рис. 3). Мічені клітини затримуються в цій колонці, немічені – проходять крізь неї без затримки, що сприяє сепарації клітинної суміші. Демагнітизація колонки вивільняє клітини окремою цільвої фракції.
Рис.3. Клітинний сепаратор MidiMACS
При проведенні CD34 позитивної селекції для здійснення аутологічної трансплантації СГК метод дозволяє досягти чистоти фракції CD34 клітин до 95,7% зі збереженням загальної кількості CD34 клітин у 69,5% від вихідного [8].
Магнетично-активоване сортування клітин складається із наступних стадій:
1
.
Магнітне маркування. Клітини, які
потребують подальшого виділення
з’єднуються із антиген-специфічними
частинками MACS
MicroBeads
(рис. 4 а).
2. Магнітна сепарація. Клітини розділяються на колонці, розміщеній в постійному магнітному полі сепаратора, таким чином, що мічені клітини залишаються на колонці. Решта клітин вільно проходить через колонку сепаратора (рис. 4 б).
3. Елюція магнето-активованої фракції клітин. Колонка демагнетизується та промивається відповідним буферним розчином. Елюат містить цільову фракцію клітин (рис. 4 в).
Рис. 4. Принципова схема магнетично-активованого сортування клітин.
Висновки
1. Обрання способу збагачення ГСК для проведення конкретної трансплантації основним чином залежить від джерела їх отримання та його кількості. Універсального методу на сьогоднішній день не існує, тому така ситуація вимагає ґрунтовного аналізу умов трансплантації (характеру основного захворювання та його стадії, клінічного протоколу, наявності клінічних протипоказань, надання переваги певному виду донорства) та переваг і недоліків кожного методу.
2. У разі обрання периферичної крові як джерела ГСК рекомендується застосовувати комбіновану стратегію отримання цільової фракції. Етапом попереднього концентрування доцільно обрати метод лейкоферезу (цитоферезу), а заключною стадією рекомендовано обрати метод магнетично-активованого сортування клітин за допомогою системи MACS.
3. У разі обрання кордової крові як основного джерела ГСК, беручи до уваги невеликі об’єми вихідного матеріалу (близько 200 мл), рекомендується застосовувати обрати метод магнетично-активованого сортування клітин за допомогою системи MACS.
4. Для одержання ГСК із кісткового мозку рекомендовано проводити попереднє очищення методом центрифугування в градієнті щільності та подальшу селекцію за допомогою магнетично-активованого сортування.