2. Виділення стовбурових клітин за допомогою процедури аферезу
Отримання стовбурових клітин може відбуватися як із кісткового мозку, так і з периферичної системи кровообігу. Для отримання клітин з периферичної кровоносної системи людини часто застосовують процедуру аферезу.
Аферез (від гр. ἀφαίρεσις – відбирання) – це метод отримання окремих фракцій крові шляхом її сепарації на спеціальній центрифузі. Принцип роботи аферезної системи базується різниці густини клітин та швидкості їх осадження за рахунок різних розмірів. Дана методика передбачає використання особливої центрифуги (рис.1), яка дозволяє в процесі своєї безперервної роботи відбирати необхідні шари плазми і клітинної маси.
Розрізняють декілька різновидів аферезу:
плазмаферез – виділення плазми крові та повернення еритроцитів;
тромбоферез – виділення тромбоцитів з невеликою кількістю плазми та повернення крові з еритроцитами пацієнту;
цитаферез (лейкоферез) – виділення клітинних компонентів крові з метою їх модифікації та повернення пацієнту.
Рис. 1. Принципова схема аферезного апарату безперервного току:
1. Вхід цільної крові від донора/пацієнта; 2. Шар плазми крові;
3. Шар лейкоцитів; 4. Шар еритроцитарної маси;
5. Відбір необхідної фракції.
Для одержання гемопоетичних стовбурових клітин, проведення аферезу супроводжується підключенням пацієнта до аферезного апарату, який відбирає його венозну кров та виділяє з її складу лекоцитарну фракцію (лейкоконцентрат). Об’єм крові, з якого вилучили цільову фракцію повертається в кровоносну систему донора. Задля накопичення достатньої кількості трансплантату часто призначають повторні сеанси аферезу.
Для ефективної аутотрансплантації кровотворних кліитин необхідно більше 2∙106 CD34+ клітин на кг ваги пацієнта. Перед виділенням СКПК необхідно мобілізувати їх із кісткового мозку, що досягаються стимуляцією гранулоцит-колонієутворюючим фактором (G-CSF). Дана процедура дозволяє зібрати мононуклеари периферичної крові із вмістом стовбурових клітин (CD34+) до 0,1 – 1%. Об’єм крові, що проходить через сепаратор значно залежить від пацієнта та процедур стимуляції та сепарації. Зазвичай використовують методику великого об’єму лейкоферезу із обробкою від 4 до 6 об’ємів циркулюючої крові, що відповідає 10 – 15 л та 2 – 6 год. Після аферезу клітини можуть бути розділені на більш чисті фракції за допомогою методів магнітної сепарації або проточного флуоресцентного сортування.
Рис. 2. Аферезна система Сobe-Spectra (Gambro BCT).
Аферезні системи Сobe-Spectra (Gambro BCT) (рис. 2) спеціалізовані для виділення окремих фракцій клітин. Збагачення стовбурових клітин із периферичної крові проводиться в два етапи у повністю автоматизованому режимі: перший – відділення еритроцитів та лейкоцитів від плазми з тромбоцитами і накопичення мононуклеарів в окремій зоні камери, другий – продавлювання мононуклеарів плазмою в контейнер-збірник [7].
Перевагою аферезу є те, що ця процедура – нетравматична і безпечна, навіть для дуже маленьких дітей .