11. Возрастные изменения микрофлоры полости рта

Полость рта эмбриона обычно стерильна. Первичное инфицирование происходит при прохождении через родовые пути. Сначала полость рта колонизируют бифидобактерии, кишечная палочка, энтерококки, зеленящие стрептококки,Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium pseudodifhtericum и Candidi albicans. Через несколько недель полость рта колонизируют анаэробные бактерии, спирохеты, гемофилы и нейссерии.

У младенцев, на спинке языка наиболее часто выделяют стафилококки и стрептококки (особенно Streptococcus salivarius). На слизистой оболочке щек преобладают стрептококки. На твердом небе около сагиттальной линии у младенцев преобладают грамположительные кокки. При формировании молочных зубов появляются условия для колонизации полости рта другими микроорганизмами, в том числе анаэробами.

У взрослых с полным прикусом преобладают грамотрицательные кокки. В 10,5% случаев выделяют грамотрицательные палочки. У детей с молочным прикусом на миндалинах обнаруживают практически все виды микроорганизмов; в 12,1% случаев выделяют грамотрицательные палочки.

Обильный рост анаэробов, а также появление простейших наблюдают при прорезывании зубов. Содержание стафилококков вариабельно: их выделяют у 70-80% младенцев, у 30-50% детей младшего возраста; у подростков их содержание снижается, а позднее оно вновь повышается. С возрастом повышается содержание анаэробных бактерий, лактобацилл, стафилококков, кандид и простейших.

Потеря зубов в пожилом возрасте приводит к значительному уменьшению содержанию облигатных анаэробов. Наличие съемных протезов приводит к развитию хронического воспаления под основой (базисом) протеза с нарушением слюноотделения и орошения слизистой оболочки. В подобных ситуациях резко возрастает колонизация грибами Candida, а также бактериями, происходящими из ЖКТ, - эшерихиями, энтерококками, и др.

В первые месяцы жизни ребенка в полости рта преобладают аэробы и факультативные анаэробы. Это связано с отсутствием у детей зубного ряда, необходимого для существования строгих анаэробов. Среди микроорганизмов, обитающих в этот период в полости рта, преобладают стрептококки, преимущественно S. salivarius, лактобактерии, нейссерии, гемофиллы и грибы рода Candida, максимум которых приходится на 4 месяце жизни. В складках слизистой оболочки полости рта могут вегетировать незначительные количества анаэробов -вейлонеллы и фузобактерии. Прорезывание зубов способствует резкому изменению качественного состава микроорганизмов, которое характеризуется появлением и быстрым нарастанием количества строгих анаэробов. Одновременно происходит распределение микроорганизмов и "заселение" ими полости рта в соответствии с особенностями анатомического строения. При этом образуются многочисленные микроэкосистемы с относительно стабильными микробными популяциями. Спирохеты и бактероиды появляются в полости рта лишь к

14 годам, что связано с возрастными сдвигами в гормональном фоне организма.

12. Факторы специфической и неспецифической защиты полости рта

Неспецифические факторы защиты полости рта обусловлены антимикробными свойствами слюны и барьерной функцией клеток слизистой оболочки и подслизистого слоя. За сутки слюнные железы продуцируют от 0,5 до 2,0 л. слюны, которая обладает выраженными бактериостатическими и бактерицидными свойствами благодаря содержащимся в ней гуморальным факторам: лизоциму, лактоферрину, лактопероксидазе, компонентам системы комплемента, иммуноглобулинам.

ЛИЗОЦИМ является одним из факторов естественного гуморального иммунитета. Он является ферментом мурамидазой и оказывает на микроорганизмы литическое и бактерицидное действие, разрушая мурамовую кислоту клеточных оболочек. Совместно с пропердин - комплементарной системой лизоцим обусловливает бактерицидные свойства сыворотки усиливает фагоцитарную способность лейкоцитов, стимулирует опсоническую активность сыворотки крови. Лизоцим лейкоцитов принимает участие в процессах внутриклеточного переваривания микробов. В организме лизоцим содержится во всех органах и тканях, но наибольшее его количество обнаруживается в слезной жидкости, носовом секрете и слюне. Сравнительно высокое содержание лизоцима в слюне обуславливает своеобразный местный иммунитет слизистой полости рта. Поэтому небольшие оперативные вмешательства в полости рта редко осложняются воспалительными процессами.

При целом ряде заболеваний и патологических воздействий лизоцимная активность секретов значительно изменяется, что позволяет судить о состоянии иммунологической реактивности организма.

ЛАКТОФЕРРИН - железосодержащий транспортный белок, бактериостатическое действие которого связано со способностью конкурировать с бактериями за железо. Его роль в местном иммунитете полости рта четко проявляется в условиях грудного вскармливания, когда новорожденные с молоком матери получают высокие концентрации этого белка в сочетании с секреторными иммуноглобулинами (SIgA)

ЛАКТОПЕРОКСИДАЗА - термостабильный белок, который в комплексе с тиоционатом и перекисью водорода проявляет бактерицидное действие. Он устойчив к действию пищеварительных ферментов, активен в широком диапазоне рН от 3,0 до 7,9. В полости рта блокирует адгезию S. mutans. Лактопероксидаза обнаруживается в слюне детей с первых месяцев жизни.

СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА выявлена в слюнных железах. Она синтезируется и секретируется макрофагами.

СЕКРЕТОРНЫЙ IgА может активировать и присоединять комплемент по альтернативному пути. IgG и IgM обеспечивают активацию комплемента по классическому пути. Слюна содержит тетрапептин СИАЛИН, который нейтрализует кислые продукты, образующиеся в результате жизнедеятельности микрофлоры зубных

бляшек, вследствие чего обладает сильным противокариозным действием. В слюне здоровых людей всегда обнаруживаются полиморфноядерные лейкоциты, моноциты, лимфоциты, которые попадают в нее из десневых карманов,

В местном иммунитете полости рта большую роль играют клетки соединительной ткани слизистой оболочки. Основную массу этих клеток составляют

ФИБРОБЛАСТЫ и ТКАНЕВЫЕ МАКРОФАГИ, которые легко мигрируют в очаг воспаления. Фагоцитоз на поверхности слизистой оболочки и в подслизистой соединительной ткани осуществляют гранулоциты и макрофаги. Они способствуют очищению очага от патогенных бактерий. Между коллагеновыми волокнами вокруг сосудов располагаются тучные клетки -потенциальные участники аллергических реакций анафилактического типа. По содержанию иммуноглобулинов различаются ВНУТРЕННИЕ И ВНЕШНИЕ СЕКРЕТЫ ПОЛОСТИ РТА. ВНУТРЕННИЕ секреты представляют собой отделяемое десневых карманов, в которых содержание иммуноглобулинов близко к их концентрации в сыворотке крови. Во ВНЕШНИХ секретах, например, слюне, количество IgA значительно превышает их концентрацию в сыворотке крови, в то время как содержание IgM, IgG, IgE в слюне и сыворотке примерно одинаково. Показано, что SIgA присутствует в слюне у детей с момента рождения, к 6-7 дню уровень его в слюне увеличивается почти в 7 раз. Нормальный синтез SIgA является одним из условий достаточной устойчивости детей первых месяцев жизни к инфекциям, поражающим слизистую полость рта. Они подавляют адгезию бактерий, нейтрализуют вирусы и препятствуют всасыванию антигенов (аллергенов) через слизистую оболочку.

13. Зубная бляшка — это высокоупорядоченное бактериальное сообщество. Существование микроорганизмов внутри своего рода панциря (биопленки) существенно меняет их свойства, в частности изменяется степень вирулентности и резистентности, поверхностная пленка является защитой от действия антибиотиков и антимикробных компонентов ротовой жидкости. Достаточно подробно изучена динамика образования зубной бляшки, которая начинает формироваться уже через 2 ч после чистки зубов. В течение суток на поверхности зуба преобладает кокковая флора, спустя 24 ч — палочковидные бактерии, через 2 сут — нитевидные бактерии. Полностью сформированная зубная бляшка образуется через 6—9 дней и представляет собой массу бактерий, которые около поверхности зуба располагаются строго под прямым углом. Ближе к периферии их расположение становится не таким упорядоченным. По мере развития зубной бляшки изменяется и ее состав. Сначала преобладают аэробные микроорганизмы (существующие в присутствии кислорода), позже — по мере созревания бляшки — анаэробные. В последние годы многие ученые рассматривают зубную бляшку как биопленку. Сущность нового подхода состоит в следующем: в соответствии с очередностью внедрения микроорганизмов в состав бляшек последними ее заселяют нитевидные и веретенообразные формы, выделяющие экзополисахариды, которые образуют вязкую субстанцию. Таким образом, все входящие в состав бляшки микробы оказываются изолированными от других микробных сообществ в своем «общежитии». В таком состоянии эта биопленка (или бляшка) имеет прямой доступ к питанию, а значит, к размножению и реализации своего повреждающего потенциала на прилежащие мягкотканные образования (в частности, на клетки соединительного эпителия). зубная бляшка Более того, входя в состав биопленок, бактерии обретают новые свойства за счет обмена генной информацией между колониями, в частности приобретают большую вирулентность и в то же время резистентность к антибактериальным воздействиям. Именно этим и объясняется потеря чувствительности микроорганизмов к ранее эффективным лечебным препаратам при хроническом течении процесса и, соответственно, при длительном лечении в отличие от свободных или плавающих микробов, не связанных в биопленки. Состав зубных бляшек сильно варьирует у разных индивидуумов. Одной из причин такого различия является разное поступление с пищей углеводов, которые способствуют накоплению в бляшке органических кислот. В процессе формирования зубной бляшки различают три основные фазы: 1-я фаза — формирование пелликулы, которая покрывает поверхность зуба. 2-я фаза — первичное микробное обсеменение. 3-я фаза — вторичное микробное обсеменение и сохранение бляшки.

14. СТАФИЛОКОККИ. Семейство Micrococcaceae, род Staphylococcus Грамположительные кокки, располагаются в мазках скоплениями. Колонии гладкие, блестящие, от белого до ярко-желтого цвета. При росте на 5% кровяном агаре большинство штаммов S. aureus и некоторые штаммы S. epidermidis образуют вокруг колоний зону гемолиза.

На следующих этапах выделяют чистую культуру и проводят видовую идентификацию выделенных стафилококков.

Установление принадлежности культуры к роду Staphylococcus проводят по культуральным (колонии на ЖСА от белого до ярко-желтого цвета, на кровяном агаре зона гемолиза), морфологическим (грамположительные кокки, располагающиеся одиночно, парами, но чаще скоплениями в виде " гроздьев винограда"), биохимическим (ферментация глюкозы в анаэробных условиях) свойствам. На последнем этапе устанавливают видовую принадлежность стафилококков.

СТРЕПТОКОККИ. Семейство Streptococcaceae, род Streptococcus.

Грамположительные кокки, располагающиеся в мазках короткими или длинными цепочками.

По виду гемолиза на 5% кровяном агаре стрептококки делятся на 3 группы:

1. Гемолитические стрептококки, вызывающие полный лизис эритроцитов с прозрачной зоной гемолиза. Колонии могут быть:

а) мукоидные, крупные, блестящие в диаметре 1,5 -2,5мм., напоминающие капельки росы. Данный вид колоний характерен для капсульных штаммов S. pyogenus.

б) шероховатые, до 2,5 мм. в диаметре серо-белого цвета с приподнятым центром. Этот вид колоний характерен для штаммов, содержащих М - протеин.

в) гладкие, мелкие, до 1,5 мм. в диаметре сферической формы, блестящие.

2. Зеленящие стрептококки - образуют на 5% кровяном агаре полупрозрачную, зеленоватого цвета зону гемолиза. Колонии мелкие, до 1,5 мм. в диаметре, серовато-зеленоватого цвета с гладкой, либо шероховатой

поверхностью. Этот тип колоний характерен для S. salivarius, S. sanguis.

3. Негемолитические стрептококки - не реагируют с эритроцитами, не вызывают гемолиза.

После микроскопического изучения, производят пересев колоний в питательный бульон с сывороткой (10%) или глюкозой (0,2%). Инкубируют при температуре 37 °С , 24 часа.

На следующий день учитывают характер роста стрептококков в жидкой питательной среде, делают мазки, окрашивают по Граму. Характер роста может быть различным:

а) придонно-пристеночный рост с образованием мелко-крошковатого осадка и сохранением прозрачности среды. Микроскопически выявляются длинные цепочки грамположительных кокков.

б) придонный рост в виде пушистого, рыхлого осадка с сохранением прозрачности среды или помутнением надосадочного слоя. Микроскопически выявляются цепочки грамположительных кокков, с уменьшением длины цепочек возрастает наклонность к диффузному росту.

в) диффузный рост с интенсивным помутнением бульона и образованием гомогенного осадка. Идентификацию культур гемолитического стрептококка осуществляют на третий день исследования по методу Ленсфильда. Принцип метода: образование видимого преципитата в результате взаимодействия группоспецифического полисахарида "С" с соответствующими ему антителами группоспецифической антистрептококковой сыворотки.

ВЕЙЛОНЕЛЛЫ - относятся к роду Veilonella. Мелкие грамотрицательные кокки, неподвижны, спор не образуют, располагаются в мазках парами или короткими цепочками. Строгие анаэробы. Хемоорганотрофы. Растут на средах содержащих лактат, рН 6,5-8,0. Колонии мелкие, гладкие, маслянистые, серовато-белого цвета. Углеводы не

ферментируют, желатин не разжижают, индол не образуют, гемолитическими свойствами не обладают, восстанавливают нитраты в нитриты.

НЕЙССЕРИИ - род Neisseria. Бобовидные кокки, грамотрицательные, располагаются парами или небольшими скоплениями. Неподвижны. Аэробы или факультативные анаэробы. Растут на МПА с добавлением крови или сыворотки. Колонии светлые, полупрозрачные. Биохимически малоактивны (расщепляют глюкозу и мальтозу). Обладают цитохромоксидазой и каталазой.

Пептострептококки — это семейство грам-позитивных облигатноанаэробных кокков, которое включает два рода: Peptostreptococcus и Peptococcus. Широко представлены во всех нишах полости рта.

Обладают высокими адгезивными свойствами по отношению к эпителию и эмали зуба, а также выраженной способностью к агрегации с другими бактериями полости рта, в частности, с бактероидами и фузобактериями, что способствует формированию ассоциаций этих групп резидентов-оппортунистов при развитии гнойно-воспалительных процессов. Типичный представитель — Peptostreptococcus anaerobius — часто и в большом количестве определяется в содержимом пародонтальных карманов, гнойном экссудате при различных видах одонтогенной инфекции.

Moraxella (ранее Branchamella) catarrhalis — грам-отрицательный аэроб, близкий к Neisseria, обитает в полости рта; вызывает отиты, синуситы

Энтерококки (лат. Enterococcus ) — род грам-положительных кокков подкласса лактобактерий. Часто представлены парами (диплококки) или короткими цепочками, трудноотличимы от стрептококков по физиологическим характеристикам. Два вида являются основными симбиотическими организмами кишечника человека: E. faecalis (90—95 %) и Enterococcus faecium (5—10 %). Вызывает многие клинически важные инфекции

15. Энтеробактериями грамотрицательные все кишечные бактерии. Они могут вызывать воспалительные заболевания мочеполовой сферы человека. Существует 9 видов энтеробактерий, среди которых и эта бактерия, и сальмонелла. В здоровой микрофлоре человека содержится определенное количество кишечной палочки. Патогенная форма этой бактерии приводит к различным инфекционным заболеваниям, например, уретрит и цистит. Заразиться кишечной палочкой можно орально-фекальным способом или же при половом контакте через анус. Эта бактерия также может попасть в мочеполовую систему через кровь. Инфекция обычно поражает органы, находящиеся около кишечника – уретра, матка, влагалище, желчный пузырь и другие. У детей кишечная палочка также может быть локализована в легких. При распространении этого микроорганизма по всему организму обычно начинается сепсис. Выявить данную бактерию можно только проведением бактериологического исследования через мазок. Кроме кишечной палочки, к энтеробактериям также относят и цитробактерия и сальмонелла. Последняя вызывает сальмонеллез, воспаление эндометрия и мочевыводящих путей. Ни этот микроорганизм, ни другие энтеробактерии не способны вызвать заболевание, находясь в кишечнике. Воспалительные процессы начинаются тогда, когда бактерия попадает в ткани организма. В основном, это легкие, мочеполовая система, брюшина и желчные пути, а также оболочки мозга.

Гемофилы- мелкие палочковидные грамотрицательные микроорганизмы. Выделенные бактерии, которые впоследствии были включены в род Haemophilus, долгие годы считались возбудителем гриппа. При дальнейшем их изучении было установлено, что они не являются возбудителями гриппа, а способны вызывать различные воспалительные процессы. Морфология и физиология Haemophilus influenzae имеет вид мелких палочек. Встречаются нитевидные формы. Свежевыделенные бактерии имеют капсулу. Спор не образуют. Палочки инфлюэнцы требовательны к условиям культивирования, они нуждаются в присутствии гемина и НАД (никотинамиддинуклеотида). Гемин освобождается из эритроцитов при нагревании. Для культивирования используют агар с гретой кровью. Выросшие колонии небольшие, прозрачные, плоские. Обладают небольшой ферментативной активностью. Расщепляют глюкозу и сахарозу с образованием кислоты, менее постоянно расщепляют галактозу, фруктозу, мальтозу и ксилозу. Патогенность и патогенез Вирулентные свойства Н.influenzae связаны с капсульным полисахаридом, который защищает бактерии от фагоцитоза. Токсичность связана с ЛПС и продукцией мембранотоксина (гемолизина). Гемофилы инфлюэнцы выделяют фермент протеазу, разрушающую секреторные иммуноглобулины (SIgA). В организме человека Haemophilus influenzae локализуется на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и вызывает у человека заболевания с различными клиническими проявлениями: менингит, эндокардит, поражения дыхательного тракта, отит, конъюнктивит, гнойные воспалительные поражения суставов и др. Некапсульные варианты возбудителя часто выделяются от больных хроническими бронхитами, бронхиальной астмой. Наиболее часто болеют дети до 5 лет. Экология и эпидемиология

У здоровых людей средой обитания Н. influenzae является слизистая оболочка верхних дыхательных путей. Источник инфекции - человек. Передача происходит воздушно-капельным путем. Во многих случаях является причиной вторичных инфекций, которые возникают как осложнения после перенесения основного заболевания в связи с развитием иммунодефицита.

Эйкенеллы - род палочковидных подвижных аспорогенных грам- хемоорганотрофных факультативно-анаэробных бактерий. Размер клеток 0,3 - 0,4x1,5 -4,0 мкм, образуют короткие филаменты. Растут при 35-37°С Ферментируют глюкозу и др. углеводы. В аэробных условиях рост стимулируется гемином. Выделяют из полости рта и кишечника человека. Типовой вид (единственный) - Е.corrodens. Возбудитель оппортунистических инфекций. Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) — грамотрицательная подвижная (монотрих) палочковидная бактерия. Обитает в воде и почве, условно патогенна для человека, возбудитель нозокомиальных инфекций у человека. Лечение затруднительно ввиду высокой устойчивости к антибиотикам. Прямая или искривлённая с закруглёнными концами палочка, 1—5 х 0,5—1,0 мкм, монотрих. Хемоорганогетеротроф, облигатный аэроб Растёт на МПА (среда окрашивается в сине- зелёный цвет), МПБ (в среде помутнение и пленка, также сине-зелёный цвет). Растёт при 42 °C (оптимум — 37 °C), селективная среда — ЦПX-агар (питательный агар с цетилперидиниум-хлоридом). Образует протеазы. На твёрдых питательных средах диссоциирует на три формы- R-, S-. и M- форму^. Pseudomonas aeruginosa обнаруживается при абсцессах и гнойных ранах, ассоциирована с энтеритами и циститамиP. aeruginosa является одним из распространённейших возбудителей нозокомиальных инфекций ввиду того, что P. aeruginosa особенно легко поражает лиц с ослабленным иммунным статусом. Факторами патогенности P. aeruginosa является наличие подвижности, токсинообразование, продукция гидролитических ферментов. Прогноз ухудшается высокой резистентностью к действию антибиотиков.

16. БАКТЕРИОИДЫ. К роду Bacterioides относятся полиморфные, мелкие, грамотрицательные палочки, чаще с биполярной окраской. Спор не образуют, строгие анаэробы. Внешне колонии бактероидов бывают различными: мелкие, плоские, непрозрачные, серовато-белые с ровными краями, светло-коричневые средних размеров, желтовато-белые, непрозрачные, выпуклые, с зазубренными краями. Нередко обращает на себя внимание отвратительный запах при росте бактериоидов на питательных средах. На кровяном агаре образуют колонии черного цвета растут в 20% желчи. В сахарном бульоне образует помутнение,

Наиболее часто в полости рта встречается В. oralis. Штаммы В. oralis на среде с кровью образуют колонии полупрозрачные, гладкие, гемолиз отсутствует. Интенсивно сбраживает углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу) с образованием янтарной кислоты.

ФУЗОБАКТЕРИИ. К роду Fusobacterium относятся грамотрицательные, тонкие, нитевидные палочки с заостренными концами, могут располагаться цепочками, облигатные анаэробы. Хемоорганотрофы. Растут на кровяном агаре. Колонии мелкие, желтые, окруженные зоной альфа-гемолиза. Ферментируют глюкозу, образуют сероводород, индол, обычно каталазоотрицательны. Типовой вид – F. nucleatum, обитатели ротовой полости.Порфиромонады. Род porphyromonas.

образуют короткие неподвижные палочки размером 1,0-3,0x0,5-0,8 мкм, ранее входившие в род Bacteroides. На средах с кровью образуют коричнево-чёрный пигмент (на 6-14-е сутки). Для роста нуждаются в гемине и витамине К. Порфиромонады инертны к углеводам, образуют индол, рост стимулирует внесение в среду глюкозы, цистеина и др. Все три вида — Porphyromonas asaccharolytica (типовой вид), Porphyromonas endodontalis и Porphyromonas gingivalis— выделяют из полости рта. Патогенез поражений во многом аналогичен таковому при бактероидных инфекциях; кроме того, Porphyromonas gingivalis связывает и разрушает фибриноген, секретирует коллагеназу, участвующую в повреждении дентина, а также агглютинирует эритроциты (дифференциальный признак). У человека порфиромонады вызывают гингивиты, периодонтиты, поражения мягких тканей головы и шеи, аспирационные пневмонии. Принципы микробиологической диагностики порфиромонад Аналогичны таковым при поражениях, вызванных бактероидами. На КА образуют слизистые колонии с тёмно-коричневым или чёрным центром. При длинноволновом (365 нм) проходящем УФ-облучении колонии флюоресцируют красным, жёлто-зелёным или коралловым цветом, что обусловливает их название [греч. porphyros, багряно-красный, + monas, одноклеточный организм]. Культуры порфиромонад имеют гнилостный запах. Рост порфиромонад ингибируют жёлчные соли (20%); бактерии чувствительны к ванкомицину, но резистентны к колистину и канамицину. Лечение поражений порфиромонадами Порфиромонады высокорезистентны к пенициллинам и цефалоспоринам. Препараты выбора — метронидазол, левомицетин, имипенем и клиндамицин. К роду Prevotella относятся виды P. melaninogenicus и P. intemedius. Морфология и физиология. Представляют собой полиморфные неподвижные неспорообразующие палочки. Образуют капсулу и пили. Обладают умеренными сахаролитическими свойствами. P. melaninogenicus образуют пигменты черного или темно-коричневого цвета. Патогенез. Факторы вирулентности те же, что и бактероидов. Кроме того, они продуцируют протеазу, разрушающую IgA, и образуют очень токсичный ЛПС, который может вызвать септический шок. Встречаются при абсцессах легких, плевритах и периодонтитах. Экология. Экологическая ниша - полость рта и верхние отделы респираторного тракта. Лечение. Для лечения используют современные пенициллины.