Требования к квалификации оператора

образование (преимущественно техники и лаборанты), усвоившими требования общей техники безопасности, имеющими навыки и владеющими приемами работы в химической лаборатории.

УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА

При выполнении анализа должны быть соблюдены следующие условия:

температура в термостате должна быть установлена на (371) ^оС;

стеклянная лабораторная посуда не должна иметь признаков повреждения;

весы лабораторные и КФК-2 (или спектрофотометр) должны быть поверены.

Подготовка к анализу

Приготовление раствора панкреатина. 0,090 г (точная навеска) панкреатина помещают в колбу объемом 100 см³, куда наливают 50 см³ дистиллированной воды и перемешивают в течение 30 минут на магнитной мешалке или встряхивают, после чего все содержимое переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Колбу из-под раствора панкреатина промывают (20-30) см³ дистиллированной воды и переливают ее в мерную колбу. Затем доводят объем раствора в мерной колбе дистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор готовят перед испытанием.

Подготовка к анализу поджелудочной железы крупного рогатого скота (КРС). Берут пробу поджелудочной железы, ножницами вырезают из нее часть, приблизительно, 1 х 1 см, режут на мелкие части, растирают в стерильной ступке, добавляют 50 см³ дистиллированной воды и перемешивают. Содержимое ступки переносят в колбу вместимостью 100 см³ и перемешивают в течение 30 минут на магнитной мешалке, отстаивают 30 минут. Содержимое колбы пипеткой осторожно (без комков и жира) переносят в мерную колбу (при необходимости фильтруют) вместимостью 100 см³. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой.

Приготовление фосфатного буферного раствора рН 8,6. Навеску (9,08 г) калия фосфата однозамещенного (КН₂РО₄) помещают в мерную колбу объемом 1 дм³ и растворяют дистиллированной водой, объем раствора доводят до метки (раствор а). Навеску (23,88 г) натрия фосфата двузамещенного (Na₂HPO₄12H₂0) растворяют дистиллированной водой до метки в мерной колбе вместимостью 1 дм³ (раствор б).

5 см³ раствора а помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора раствором б до метки. Раствор хранят в холодильнике не более 6 месяцев.

Приготовление раствора казеина. Навеску (2,0 г) казеина растворяют в 90 см³ фосфатного буферного раствора с рН 8,6 и нагревают в течение 15 минут на водяной бане при температуре (855) С, периодически перемешивая стеклянной палочкой. Раствор охлаждают до комнатной температуры, весь полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора до метки тем же буферным раствором.

Приготовление 0,5 м раствора карбоната натрия.

Навеску (53 г) натрия карбоната безводного помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм³, добавляют 50 см³ дистиллированной воды, перемешивают, объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. Раствор годен 7 дней.

Построение калибровочного графика. Навеску (0,0453 г) тирозина помещают в мерную колбу объемом 25 см³, добавляют 10 см³ 0,2 моль^.дм^-3 раствора хлористоводородной кислоты (ХВК), перемешивают, доводят объем до метки раствором ХВК. Отбирают 0,6; 1,2; 2,4; 3,6; 4,8; 6,0 см³ приготовленного раствора в мерные колбы объемом по 100 см³ и доводят объем растворов до метки 0,2 моль^.дм^-3 раствором ХВК. Полученные растворы содержат соответственно 0,06; 0,12; 0,24; 0,36; 0,48; 0,60 микромолей тирозина в миллилитре.

В ряд пробирок наливают по 1 см³ полученных растворов тирозина, прибавляют при перемешивании по 5 см³ 0,5М раствора карбоната натрия и по 1 см³ реактива Фолина, предварительно разведенного водой 1:2. Измеряют оптическую плотность растворов на КФК при длине волны 670 нм или на СФ при длине волны 630 нм в кювете с толщиной слоя, равной 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий смесь тех же реактивов, но вместо раствора тирозина добавляют 1 см³ дистиллированной воды.

Построение калибровочного графика: по оси абсцисс откладывают количество тирозина в микромолях на миллилитр исходного раствора, а по оси ординат – соответствующую плотность.

ВЫПОЛНЕНИЕ АНАЛИЗА

В две пробирки наливают по 2 см³ раствора казеина и помещают в термостат при температуре (37,00,1) С на 10 минут. В первую пробирку (испытуемая проба) наливают 2 см³ раствора панкреатина. Обе пробирки помещают в термостат при температуре (37,00,1) С на 15 минут (по секундомеру), затем в обе пробирки наливают по 4 см³ 5 % раствора ТХУК, перемешивают. Во вторую пробирку (контроль) наливают 2 см³ раствора панкреатина. Обе пробирки помещают в термостат при (37,00,1) С на 20 минут. После этого содержимое пробирок фильтруют через бумажный фильтр с синей лентой. Затем в новые пробирки отбирают по 1 см³ фильтратов, наливают по 5 см³ 0,5М раствора натрия карбоната и по 1 см³ реактива Фолина, предварительно разведенного водой 12. Через 20 минут измеряют оптическую плотность полученных растворов на КФК при длине волны 670 нм или на спектрофотометре при длине волны 630 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.