Методика

определения наличия термостабильной микрофлоры в агаре микробиологическом (ГОСТ 17206-84)

Введение

Настоящая методика устанавливает правила определения наличия термостабильной микрофлоры в агаре микробиологическом. Метод основан на обнаружении клеток термостабильной микрофлоры в агаре при высеве на плотную питательную среду.

ТОЧНОСТЬ АНАЛИЗА

Предел допускаемого значения погрешности при подсчете колоний в параллельных высевах на чашках с плотной питательной средой составляет 10 %.

Средства анализа

Для выполнения анализа необходимо использовать следующие средства:

термостат;

весы аналитические класса 2 с пределами измерения от 0 до 200 г, ГОСТ 24104-80;

чашки бактериологические (Петри), ГОСТ 25336-82;

газовая горелка или спиртовка, ГОСТ 25336-82;

пипетки градуированные, 1 см³, 10 см³, ГОСТ 29227-91;

колбы вместимостью (250–300) см³, ГОСТ 1770-74;

0,9%-ный раствор хлористого натрия;

спирт этиловый ректификованный, ГОСТ Р51652-00;

агар Хоттингера, МУК 4.1/4.2-588-96.

МЕТОД АНАЛИЗА

Определение наличия термостабильной микрофлоры основано на обнаружении роста микроорганизмов на плотной питательной среде.

ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

При выполнении анализа необходимо соблюдать требования общей техники безопасности при работе в микробиологической лаборатории.

ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРА

К выполнению данной методики допускаются лица со средним специальным образованием, усвоившие требования техники безопасности и имеющие навыки работы в микробиологической лаборатории.

УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА

Работу проводят с соблюдением правил асептики.

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Перед выполнением анализа проводят подготовку аналитических весов и термостата к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по их эксплуатации (паспорта на приборы).

ВЫПОЛНЕНИЕ АНАЛИЗА

В колбу вместимостью (250-300) см³ вносят 1 г агара, добавляют 100 см³ стерильного 0,9 %-ного раствора натрия хлорида и оставляют для набухания на 30 мин. После набухания агара колбу закрывают рыхлой ватно-марлевой пробкой и кипятят в течение 5 мин. Приготовленный раствор агара вносят по 0,1 см³ стерильными, предварительно нагретыми до температуры (40-45) ^оС, пипетками в стерильные, предварительно нагретые до температуры (40-45) ^оС, чашки Петри и заливают по (15-20) см³ стерильного, подогретого до температуры (50-55) ^оС, агара Хоттингера. Содержимое чашек тщательно перемешивают круговыми вращательными движениями.

После охлаждения чашки Петри переворачивают и помещают в термостат при температуре (372) ^оС на 72 часа.

ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Общее количество клеток термостабильной микрофлоры в 1 г агара вычисляют по формуле:

Х = К ^. 100 / 0,1, где:

Х – количество клеток термостабильной микрофлоры в 1 г агара;

К – среднее арифметическое значение числа выросших колоний;

100 – разведение (1 г агара в 100 см³ 0,9%-ного раствора натрия хлорида);

0,1 – количество 1 %-го раствора агара, взятого для посева, см³.

КОНТРОЛЬ ТОЧНОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Посев производят на 10 чашек Петри. Число колоний, выросших на 10 чашках, суммируют и вычисляют среднее арифметическое значение. Наличие термостабильной микрофлоры в 1 г сухого агара не должно превышать 500, 2000, 5000 клеток в зависимости от сорта препарата – высшего, первого и второго соответственно.

ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты анализа оформляют протоколом.

МЕТОДИКА

определения прочности студня с массовой долей сухого агара 0,85 %

(ГОСТ 26185-84, ГОСТ 17206-84)

ВВЕДЕНИЕ

Методика предназначена для оценки качества агара микробиологического по прочности студня, определяемой массой нагрузки, необходимой для его разрушения. Анализ проводится с использованием специального устройства Валента.

ТОЧНОСТЬ АНАЛИЗА

Коэффициент вариации значений в пяти параллельных определениях не должен превышать 5 %.

СРЕДСТВА АНАЛИЗА

При выполнении анализа должны быть применены следующие средства:

весы аналитические класса 2 с пределами измерений от 0 до 200 г, ГОСТ 24104-80;

устройство Валента, ГОСТ 26185-84;

стакан металлический вместимостью 30 см³ (высота-24 мм, диаметр–40 мм);

кристаллизатор, ГОСТ 25336-82;

термометр ртутный стеклянный лабораторный с пределами измерений от 0 до 100 ^оС, ГОСТ 215-73;

стаканы стеклянные лабораторные, ГОСТ 19908-90;

песок кварцевый, ГОСТ 22551-77;

вата медицинская гигроскопическая, ГОСТ 5556-81;

вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

МЕТОД АНАЛИЗА

Метод основан на определении массы нагрузки, необходимой для разрушения структуры студня, приготовленного из агара.

ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

При выполнении анализа необходимо соблюдать требования общей техники безопасности при работе в химической лаборатории.

УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА

При выполнении методики должны быть соблюдены следующие условия:

подвижной шток устройства Валента должен ходить плавно, без заеданий и перекосов;

грибовидная насадка, находящаяся на нижнем конце подвижного вертикально расположенного штока, должна изготовляться из антикоррозийного материала, шаровая поверхность ее должна быть полированной с диаметром 16 мм и высотой 10 мм;

масса подвижной системы, состоящая из грибовидной насадки, штока с площадкой и сосуда для груза должна быть от 90 до 100 г;

песок следует насыпать с постоянной скоростью от 10 до 12 г^.с^-1, отрегулированной перед началом опыта;

для заполнения исследуемым раствором агара допускается использование стеклянных стаканчиков вместимостью 100 см³.