Подсчет количества эритроцитов и лейко­цитов в крови

Для подсчета количества указанных клеток крови чаще используют счетные камеры и электронно-счетные приборы. Число эритроцитов можно определить также с помощью эритрогемометров и фотоэлектроколориметров.

При подсчете числа клеток крови применяют различные счетные камеры (Горяева, Предтеченского, Тома — Цейсса, Бюркера, Фукса — Розенталя, Неубауера, Тюрка и др.). Наибольшее распространение получила счетная камера Горяева.

Счетная камера — это толстое предметное стекло с четырьмя поперечными желобками, между которыми образуются 3 поперечные полосы. Средняя полоса на 0,1 мм тоньше боковых и разделена продольным желобком на две равные половины, на каждой из которых выграви­рована сетка Горяева. Если на боковые полоски наложить и притереть шлифованное покровное стекло (до появления радужных колец), то над средней полоской образуется щелевидное пространство высотой 0,1 мм.

При подсчете эритроцитов кровь разводят жидко­стью — разбавителем в меланжере, смесителе для эритроцитов или, в пробирке. Если кровь разводят в меланжере, то в капилляр его набирают кровь до метки «0,5», кончик капилляра протирают ваткой и затем в смеситель набирают до мет­ки «101» разбавляющую жидкость (0,85%-ный или 3 %-ный раствор натрия хлорида; 5 %-ный раствор нат­рия цитрата). Смеситель закрывают с обоих концов большим и средним пальцами руки и встряхи­вают 1—2 мин. В данном случае получается разведение крови 1:200. Из меланжера вначале удаляют на ватку первые 3 капли разведенной крови, а последующую ка­плю наносят на среднюю полоску счетной камеры вбли­зи от края притертого покровного стекла. Капля раз­веденной крови попадает под стекло в щелевидное пространство и заполняет камеру.

Если кровь разводят в пробирке, то в пробирку Флоринского берут 4 мл 0,85%-ного или 3%-ного раствора натрия хлорида, вносят 0,02 мл крови пипеткой от гемо­метра Сали (разведение крови 1:200) и смешивают. Па­стеровской пипеткой набирают разбавленную кровь и за­ряжают счетную камеру. Выждав 2 — 3 мин, подсчиты­вают эритроциты под микроскопом при объективе х 8 и окуляре х 15 в левом верхнем большом квадрате (раз­деленном на 16 маленьких квадратиков), а затем еще в 4 больших квадратах по диагонали сетки (всего в 5 больших квадратах).

Подсчет клеток в боль­шом квадрате начинают с левого верхнего маленького квадратика, а далее перехо­дят во 2, 3 и 4-й квадратики. После верхнего ряда считают эритроциты в ниже­расположенном ряду, на­чиная с 1-го правого квадра­тика и т. д. Эритроциты внутри маленьких квадрати­ков, а также на верхней и левой сторонах большого квадрата сосчитывают, а эритроциты на нижней и пра­вой сторонах не учитывают.

Для определения числа эритроцитов в 1 л крови поль­зуются формулой

Х= А·10¹⁰,

где X — количество эритроцитов в 1 л крови; А — число эритроци­тов, подсчитанное в 5 больших квадратах;

У здоровых животных количество эритроцитов составляет: у собак –6,0-8,5 млн/мкл, или 10¹²/л, у кошек 6,6-9,4 млн/мкл, или 10¹²/л.

При подсчете лейкоцитов в меланжер для лейко­цитов насасывают кровь до метки «0,5», а затем до мет­ки «11» набирают жидкость Тюрка (3%-ный раствор ук­сусной кислоты — 100 мл, 1 %-ный раствор генциана фиолетового или метиленового синего — 1 мл). Встряхи­вают 1 —2 мин. Уксусная кислота разрушает эритроциты, а генциан фиолетовый (или метиленовый синий) окраши­вает лейкоциты. Получают разведение крови 1:20. Выпу­скают первые 3 капли на ватку (или фильтровальную бу­мажку), а следующей каплей заполняют счетную камеру.

Для разведения крови в пробирке берут 0,4 мл жидкости Тюрка и 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали (разведение крови 1:20). Пастеровской пипеткой берут смесь и заряжают счетную камеру. Через 2 — 3 мин после оседания лейкоцитов на дно камеры начинают подсчет клеток, который проводят под микроскопом при объективе х 8 и окуляре х 15 в 100 больших квадратах, не имеющих дополнительных линий и расположенных по сетке Горяева группами по четыре квадрата.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови ис­пользуют формулу

Х=А·5·10⁷,

где X — количество лейкоцитов в 1 л крови; А — число лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах;

У здоровых животных количество лейкоцитов составляет: у собак – 8,8-11,8 тыс/мкл, или 10⁹/л, у кошек - 10,0-20,0 тыс/мкл, или 10⁹/л.