Биохимические свойства

Их определение имеет особое диагностическое значение. Для правильного представления об этиологической роли стафилококков требуется выделить его из исследуемого материала и детально изучить несколько (иногда до 50) колоний, так как многие патогенные штаммы не образуют золотистый пигмент и не вызывают гемолиз на кровяном агаре при обычных условиях. С этой целью чистые культуры стафилококков проверяют по их способности ферментировать манит, коагулировать цитрированную плазму, выделять фибринолизин и лецитиназу, ДНК-азу, обладать скрытой (потенциальной) гемолитической способностью. Для более полной характеристики патогенных штаммов определяют у них способность выделять дермонекротоксин, токсин общего действия и энтеротоксин. Отдельные биохимические свойства, соответственно, учитывают как факторы патогенности.

Чистую культуру засевают в молоко, среды с углеводами, МПЖ. Стафилококки обладают протеолитическими свойствами:в столбике желатина после засева уколом через 36-48 ч наряду с обильным ростом по линии укола наблюдается начальное разжижение среды, которое затем увеличивается, и к 4-5 суткам образуется воронка, наполненная жидкостью. Также медленно разжижается свернутая кровяная сыворотка; молоко свертывается, затем образовавшийся сгусток казеина пептонизируется.

Из углеводов ферментируют лактозу, глюкозу, глицерин, сахарозу, мальтозу, маннит. К другим биохимическим свойствам стафилококков следует отнести продуцирование H₂S, аммиака, фермента коагулазы - бактериальная протеиназа, свертывающая плазму крови животных. Её наличие служит одним из наиболее важных и постоянных критериев патогенности стафилококков. Индол не образуют.

Ферментация маннита

Рассматривается как свойство патогенных видов стафилококков. Её определяют путем посева на МПБ, содержащий 0,5% маннита, индикатор Андрэдэ и газовые поплавки. После 1-2 суточной инкубации при 37°С среда с патогенным штаммом микроба краснеет; в газовых поплавках иногда скапливаются пузырьки газа. Это свойство хорошо выявляется на полужидкой среде с теми же компонентами.

Плазмокоагулазную активность

Определяют в специальной реакции – плазмокоагуляции (РПК). Для постановки её необходимы молодые культуры стафилококков; для контроля – заведомо коагулирующий и некоагулирующий штаммы микробов, нативная или сухая цитратная плазма кролика.

Кровь берут из сердца кролика массой 1,5-2 кг, зафиксированного в спинном положении, в объеме 8 мл иглой, надетой на шприц, промытый 5%-м раствором цитрата натрия. Её осторожно сливают в пробирку с 2 мл 5% -го раствора цитрата натрия и осторожно перемешивают. Кролику же вводят подкожно 8 мл стерильного физиологического раствора. Пробирку с кровью выдерживают при 4°С до осаждения эритроцитов. Для ускорения процесса цитратную кровь можно центрифугировать при оборотах 1500-2000 мин^-1. Надосадочная жидкость – это и есть плазма. Срок её годности при хранении в холодильнике составляет 4-5 суток.

Перед постановкой РПК отсасывают необходимое количество плазмы, разводят её физиологическим раствором 1:5, разливают в пробирки по 0,5 мл и вносят в них по 0,5 мл бульонной культуры. При исследовании культур, выращенных на плотной среде, плазму разводят 1:20, разливают в пробирки по 1 мл и диспергируют в ней 1 петлю агаровой культуры стафилококка. В обоих случаях пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37°С. Учитывают результат через 1,2,3 и 24 часа. Наличие плотного или желеобразного сгустка указывает на положительный результат реакции. Для признания штамма патогенным срок наступления реакции не имеет значения.

Обычно культуры, активно продуцирующие коагулазу, дают положительную реакцию уже через 2—3 ч, а если они обладают и выраженной фибринолитической активностью, то первоначально образовавшиеся сгустки могут подвергнуться расплавлению к концу суток. Слабокоагулирующие штаммы могут давать положительную реакцию в поздние сроки — к концу суток. Опыты, давшие сомнительный результат, необходимо повторить.

Некоторые исследователи, получив отрицательный или сомнительный результат, оставляют пробирки на столе. Этого делать нельзя, так как свертывание плазмы в более поздние сроки может носить не специфический характер и его не следует принимать во внимание.

Стафилококки, дающие положительную коагулазную пробу, должны рассматриваться как потенциально патогенные, независимо от наличия или отсутствия у них гемолитических свойств и характера пигмента, их относят к виду St. aureusи в дальнейшем подвергают фаготипизации и проверке на чувствительность к антибиотикам.