§8. Экспериментальная часть
Опыт № 1. Амфотерные свойства аминокислот.
а) в пробирку поместите 5 капель 1 % раствора α-аланина или другой аминокислоты и добавьте по каплям 9,1 % хлороводородной кислоты, подкрашенной индикатором конго в синий цвет до появления розово-красной окраски. Напишите уравнение реакции и объясните изменение окраски.
б) В пробирку поместите 5 капель 1 % раствора аминокислоты и по каплям добавьте 0,1 % раствора гидроксида натрия, подкрашенного фенолфталеином, до исчезновения окраски. Объясните происходящее явление и напишите уравнение реакции.
Опыт № 2. Реакция глицина с азотистой кислотой.
В пробирку поместите 5 капель 1 %-го раствора глицина и равный объем 5 %-го раствора нитрита натрия. Добавьте 2 капли конц. уксусной кислоты и осторожно взболтайте смесь. Наблюдается выделение газа; реакция используется для качественного определения аминогрупп в аминокислотах. Напишите схему взаимодействия глицина с азотистой кислотой.
Опыт № 3. Нингидриновая реакция на аминогруппу в α-положении.
Растворы α-аминокислот при нагревании с нингидрином дают синее окрашивание. В этой реакции α-аминокислоты окисляются нингидрином, подвергаясь при этом окислительному дезаминированию и декарбоксилированию.
нингидрин α-аминокислота
альдегид нингидрин (восст.)
Восстановленный нингидрин конденсируется с другой молекулой нингидрина в окисленной форме, образуя окрашенный продукт конденсации:
В пробирку поместите 4 капли 1 %-ного раствора глицина и 0,1 %-ного раствора нингидрина. Содержимое пробирки осторожно нагреть до появления сине-красного цвета.
Опыт № 4. Биуретовая реакция на пептидные связи.
В щелочной среде при добавлении к раствору белка гидрата окиси меди образуется комплексное (хелатное) соединение розово-фиолетового цвета. Такую реакцию дают белки, некоторые аминокислоты, пептиды, биурет, средние пептиды.
Впервые данный комплекс получен Биуретом (NH2CONHCONH2). Отсюда и название – биуретовая реакция. Схематично реакцию Cu(ОН)2 с пептидами можно представить так:
В пробирку поместите 5–6 капель белка, добавьте равный объем 30 %-го раствора NaOH и по стенке добавьте 1–2 капли раствора сульфата меди. Наблюдается появление красно-фиолетового окрашивания.
Опыт № 5. Ксантопротеиновая реакция на ароматические аминокислоты – реакция нитрования бензольного ядра циклических аминокислот концентрированной азотной кислотой.
тирозин динитротирозин
В результате образуются нитропроизводные аминокислот, имеющие желтую окраску. В щелочной среде нитропроизводные образуют соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет (ксантиновый).
В белке содержится достаточное количество ароматических аминокислот, поэтому ксантопротеиновая реакция применяется и для определения белков.
В пробирку поместите 10 капель раствора тирозина (раствор белка) и 2 капли конц. азотной кислоты.
Содержимое пробирки осторожно нагрейте до растворения осадка. Образуется раствор лимонно-желтого цвета. Охладив пробирку, осторожно добавьте 1–3 капли 10 %-го раствора гидроксида натрия до появления ярко-желтого цвета. Написать уравнение реакции.