3.Методы диагностики

Диагноз на ассоциированную кишечную инфекцию ставится на основании эпизоотических данных, клинических признаков, патизменений и результатов лабораторного исследования.

Эпизоотологические данные. Болезнь возникает в первые дни и недели жизни животных и проявляется чаще в виде энзоотической вспышки, развитию которой способствуют различные факторы, связанные с несоблюдением технологических и ветеринарно-санитарных требований воспроизводства стада, а также нарушением режимов содержания и кормления молодняка.

Течение и симптомы болезни. Болезнь может протекать в кишечной (энтеритной) и септической формах.

Клиническими признаками: потеря аппетита, понос, переходящий в профузные, , учащенное дыхание и сердцебиение, обезвоживание организма (при затяжном течении); нередко наблюдается поражение центральной нервной системы (возбуждение, судороги), редко пневмония, артриты; температура тела в пределах нормы, иногда повышена на 0,5-1°С.

Патологоанатомические изменения. Катаральный или катарально-геморрагического гастроэнтерит, на слизистой желудка, тонкого отдела кишечника и слепой кишки могут встречаться язвы и множественные кровоизлияния; иногда отмечается очаговая катаральная пневмония и отек легких, дистрофия печени; е брыжеечные лимфатические узлы увеличены, отечны; гиперемия кровеносных сосудов и отек головного мозга.

Лабораторная диагностика ассоциированной кишечной инфекции включает выделение культур с последующей их идентификацией по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам и определение их патогенности.

Для посмертной диагностики в лабораторию направляют 2-4 свежих трупа мелких погибших или убитых с диагностической целью больных животных (желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами).

От трупа крупного животного отбирают: голову (головной мозг), трубчатую кость, сердце с кровью, селезенку, долю печени с желчным пузырем, регионарные брыжеечные лимфатические узлы, пораженный отрезок тонкого отдела кишечника с содержимым, перевязанный с двух концов лигатурой (в отдельной таре или полиэтиленовом пакете).

Для прижизненной бак диагностики направляют фекалии больных диареей животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами. Пробы фекалий берут от 5-6 больных животных одной фермы в стерильные пробирки по 2-3 г непосредственно из прямой. При невозможности доставки проб через 3-4 часа после взятия их консервируют 30% раствором глицерина.

Первый день. Патматериал (кроме содержимого тонкого отдела кишечника и фекалий) засевают в пробирки с МПБ и дифференциально- диагностические среды Эндо (или Левина) и среду Плоскирева (или висмут-сульфит агар). Содержимое тонкого отдела кишечника и фекалий засевают только на указанные выше плотные среды. А также для выделения из фекалий сальмонелл их засевают еще в одну из сред обогащения (селенитовый бульон, магниевую, Мюллера или др.) в соотношении 1:5.

Содержимое кишечника, берем путем соскоба с пораженного участка слизистой оболочки, суспензируют в 10 см³ стерильного физ. раствора, и засевают петлей на плотные дифференциально-диагностические среды штрихом по всей поверхности среды. Также засеваем фекалий. Все посевы инкубируют при температуре 37-38°С в течение 18-24 часов, а на агаре Плоскирева 24-36 часов. Из патматериала делают мазки-отпечатки окрашивают по Гинсу для выявления клебсиелл.

Второй день. Просмотр посевов. При обнаружении в МПБ помутнения, делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, при обнаружения мелких грамотрицательных палочек пересевают культуру на Эндо (или Левина) и среду Плоскирева (или висмут-сульфит - агар), которые помещают в термостат (37-38 ° С ) на 18-24 часа.

Пересев культур, из МПБ, проводят в том случае, если отсутствует рост колоний на этих средах в первичных посевах из патматериала.

При обнаружении на плотных средах лактозоположительных бактерий (круглые колонии, красно-малинового цвета на агаре Эндо и темно-фиолетового цвета на агаре Левина с наличием или отсутствием металлического блеска) делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, а затем их пересевают в чашки с МПА и средой Минка в соответствии с рекомендациями по бакдиагностике колибактериоза животных.

При обнаружении на средах лактозоположительных бактерий и капсул в мазках-отпечатках, культуры пересевают в пробирки со скошенным МПА помещают в термостат на 18-24 часа.

При наличии на агаре Эндо (или Левина) роящегося налета, харак-терного для протея, пересевают его на скошенный МПА и инкубируют 18-20 часов при той же температуре.

При обнаружении на агаре Эндо или Левина лактозоотрицательных бактерий (бесцветные, светлорозовые с оттенком среды, или прозрачные с фиолетовым оттенком колонии). После просмотра эти культуры пересевают в пробирки со скошенным МПА помещают в термостат на 18-24 часа.

Из сред обогащения делают пересев на агар Плоскирева и висмут-сульфит агар, посевы инкубируют в термостате при (37-38 ° С ) 24-48 часов.

Третий день. Просматривают первичные посевы из материала на агаре Плоскирева и висмут-сульфит агаре, при обнаружении на Плоскирева лактозоотрицательных колоний (мелкие круглые колонии бесцветные, сероватого цвета, при этом среда желтеет), на ВСА – (черные с маталлическим блеском и прокрашиванием среды под колонией, или нежно зеленого цвета), отбирают типичные колонии для сальмонелл и изучают в соответствии с рекомендациями по лабораторной диагностике сальмонеллезов животных.

При обнаружении на агаре Плоскирева – ярко-розовых или светлорозовых колоний, культуру микроскопируют, а затем пересевают на скошенный МПА и инкубируют аналогично.

Суточные культуры бактерий (лактозоположительные, грамотрицательные палочки, образующие капсулу- бактерии вида Klebsiella pneumoniae) выросшие на скошенном МПА используют для изучения согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике клебсиеллеза животных.

Остальные суточные культуры выросшие на скошенном МПА, микроскопируют. При обнаружении грамотрицательных палочек, чистую культуру используют для изучения биохимических свойств с целью идентификации по роду и виду. Для этого делают посев на полужидкие среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом, мальтозой, а также на средах с мочевиной по Кристенсену, сернокислым железом Клиглера (определение сероводорода), агаре Симмонса, в бульоне Хоттингера или МПБ (опредедение индола), ПЖА (определение подвижности), среде с фенилаланином, и МПЖ.

Также можно использовать комбинированной среды Олькеницкого или Клиглера учитывают изменения, вызываемые представителями разных родов энтеробактерий в этой среде, после чего данную культуру изучают по другим необходимым биохимическим тестам (см. приложение) .

Засеянные пробирки инкубируют при температуре 37-38 °С в течение 24-48 часов.

Предварительные результаты изучения ферментативных свойств культур учитывают через 24 часа, окончательные результаты - через 48 часов. Изучение ферментативных свойств культур энтеробактерий можно проводить также с помощью тест-системы для биохимической идентификации энтеробактерий. Родовую и видовую принадлежность культур устанавливают (см. таблицу).

Следует учитывать, что у бактерий рода Proteus встречаются нероящиеся штаммы, образующие при росте на плотных питательных средах мелкие круглые колонии S-формы сероватого цвета. Важными признаками родовой идентификации таких штаммов является их способность дезаминировать фенилаланин и разжижать желатин.

При наличии у культур отклонений от основных показателей таблицы используют дополнительные тесты: реакции с метилротом и Фогес-Проскауэра, наличия образования оксидазыи др.

Четвертый и пятый день. Патогенные свойства определяют у культур бактерий, относящихся к родам Proteus, Citrobacter, Klebsiella, а также родам Escherichia и Morganella, Shigеlla, не имеющих адгезивные антигены и не типируемых по О-антигену в РА, в биопробе на белых мышах.

Для этого используют суточные агаровые культуры вышеуказанных микроорганизмов, выделенные из двух внутренних органов павших животныхили фекалий больных. С каждой из двух культур одного вида бактерий готовят смывы стерильным физиологическим раствором, устанавливают взвесь бактерий в концентрации 1 млрд. микробных клеток/см³ (10 единиц по оптическому стандарту мутности), после чего их смешивают 1:1.

Взвесями культур каждого вида бактерий заражают по три белые мыши массой 14-15 г внутрибрюшинно в дозе 0,5 см³. Биопроба считается случае гибели двух и более мышей в течение трех суток после заражения и выделения идентичной культуры из органов павшего животного.

Лабораторный диагноз считается установленным в одном из следующих случаев:

- при выделении культур, относящихся к одному виду того или иного рода, из селезенки, печени, крови сердца, головного, костного мозга (не менее, чем из двух перечисленных органов и тканей) свежего трупа животного или убитого клинически больного животного без определения их патогенности для белых мышей и установления серогрупповой принадлежности;

• при выделении из патологического материала культур, относящихся к вышеуказанным возбудителям на основании результатов серологической идентификации (Escherichia, Salmonella);

- при выделении культур, относящихся к одному виду того или иного рода, обладающих патогенностью для белых мышей.

Общий срок бактериологического исследования до 7 суток.

2. Клебсиеллез – остро протекающая инфекционная болезнь молодняка всех видов животных, протекающая с признаками пневмонии, септицемии или профузного поноса, интоксикацией и обезвоживанием организма.

Систематику см. выше.

Возбудителем болезни являются патогенные штаммы клебсиелл. Это грамотрицательные, короткие, толстые, неподвижные палочки с закругленными концами, размером 0,3-1,5´0,6-6 мкм, располагающиеся одиноч­но, парами или короткой цепочкой. Обычно они локализованы в капсуле, которая является характерным морфологическим признаком у штаммов, непосредственно выделенных от животных. При высушивании и окрашивании размеры их уменьшаются. Спор не образуют. В мазках они располагаются поодиночке, парами или короткими цепочками. Утилизируют цитрат и глюкозу, ферментируют инозит, гидролизуют мочевину, образуют сероводород. В отличие от эшерихий не выделяют индол (исключение - К. oxytoca). Оптимальная температура роста 37-38°С, крайние границы — 12-43 °С, рН среды – 7,4±0,2. На жидких средах могут давать гомогенное помутнение, плёнку или пристеночное кольцо. На плотных средах клебсиеллы образуют пышные, частично сливающиеся слизистые колонии.

Вирулентность клебсиелл обусловлена их адгезией, связанной с капсульным полисахаридом, пилями и белком наружной мембраны, последующим размножением и колонизацией энтероцитов. При разрушении бактериальных клеток освобождается эндотоксин (ЛПС). Кроме того, клебсиеллы секретируют термо- и кислотостабильный энтеротоксин и мембранотоксин с гемолитической активностью. У клебсиелл выделяют капсульные К и соматические О-антигены; однако при серологической идентификации исследуют только К-антигены, обозначаемые арабскими цифрами. Всего извес­тно около 11 О-антигенов и более 80 К-антигенов.