Патологоанатомические изменения.
При вскрытии отмечают катаральное воспаление легких, гиперемию бронхиальных и средостенных лимфоузлов, слизистая оболочка носовой полости и трахеи покрасневшая, слегка набухшая. При хроническом течении отмечают зернистую и жировую дистрофию печени, дряблость сердечной мышцы.
Лабораторная диагностика включает в себя приготовление мазков-отпечатков, окраску их по Граму, посев суспензии из патматериала или смывов из носовой полости на питательные среды, выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация, а также определение её патогенности для лабораторных животных.
В лабораторию направляют для посмертной диагностики от павших или вынужденно убитых больных животных – поражённые участки лёгких на границе со здоровой тканью, бронхиальные лимфоузлы, бронхиальную слизь, кусочки печени, селезёнки, головного мозга, сердце с кровью. Небольшие трупы свиней отсылают целиком. Материал отбирают от животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами.
Для прижизненной диагностики отбирают пробы носовой слизи и сыворотку крови. Материал доставляют в лабораторию в течение 4-6 часов с момента гибели животного, при необходимости его консервируют 30%-ным раствором глицерина или транспортируют в термосе со льдом. Тампоны с носовой слизью исследуют не позднее 4 часов с момента их отбора.
1-Й ДЕНЬ
Из присланного материала делают мазки-отпечатки, окрашивают по Граму и микроскопируют. В положительном случае в мазках-отпечатках обнаруживают мелкие, грамотрицательные, овоидные палочки.
Для выделения культуры возбудителя из материала делают посев на простые (МПА И МПБ) и селективные питательные среды: казеиново-угольный агар или бордетеллаагар, или агар Мак-Конки, кровяной агар.
Для повышения частоты выделения Вordetella bronchiseptica рекомендуется использовать селективную питательную среду, состоящую из агара Мак-Конки со 100 мкг/мл микостатина. Среда обеспечивает хороший рост возбудителя бордетеллезной инфекции, на ней сравнительно редко растут представители другой микрофлоры.
Посевы культивируют в термостате течение 24-48 часов при температуре 36±10 С.
2-Й ДЕНЬ
Просматриваем посевы (идентифицируем) - в положительных случаях на жидких средах появляется равномерное помутнение с последующим образованием осадка и пристеночного кольца, легко разбивающегося при встряхивании.
На поверхности казеиново-угольного агара, бордетеллаагара или МПА через 24 часа образуются росинчатые, блестящие, выпуклые колонии размером с булавочную головку. Они имеют маслянистую консистенцию, легко снимающуюся бакпетлей. Через 48 ч колонии приобретают серо-белый цвет.
На среде Мак-Конки - розовые со светлым центром мелкие, куполообразные, полупрозрачные колонии;
на кровяном агаре образуются золотистого цвета колонии с зоной бета-гемолиза.
Микроскопический метод.
Из типичных колоний делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют с целью изучения и идентификации (морфологических, тинкториальных свойств и чистоты культуры). Возбудитель имеет вид мелких, грамотрицательных, овоидных палочек, равномерно расположенных в мазках.
Подвижность определяют методом «висячей капли», используя суточную бульонную культуру или посевом в ПЖА.
При отсутствии роста посевы оставляют в термостате еще на 24 часа.
Дальнейшую идентификацию чистой культуры проводят по биохимическим свойствам, с целью определения родовой и видовой принадлежности.
Бактериологический метод.
Для этого делают пересев культуры на среды Гисса с глюкозой, сахарозой, лактозой, мальтозой, маннитом ( для определения сахаролитической активности); агар Симмонса (для определения усвоения цитратоаммонийных солей); агар Клиглера ( для определения образования сероводорода); среда с мочевиной (определение уреазной активности); МПБ ( определение образование индола); МПА (определение наличия фермента каталазы и постановка биопробы); кровяной агар (гемолитическая активность). Посевы инкубируют в термостате при температуре 36±10 С. течение 24-48 часов.
3-Й ДЕНЬ
Просматриваем посевы – подвижные культуры, не ферментирующие углеводы и многоатомные спирты, образующие сероводород и каталазу, растущие на среде Симмонса, образующие бетта-гемолиз на кровяном агаре, не образующие индол, расщепляющие мочевину относят к Bordetella bronchiseptica.