3. Методы идентификации

В настоящее время фармацевтический рынок полон фальсифицированнх ЛС. Поэтому, чтобы не допустить некачественную продукцию в продажу проводят идентификацию. В исследуемых фармакопеях приводятся различные методы идентификации данной группы ЛС. Проведем их анализ.

1. Производные дибензоазепина

Таблица 1. Сравнительная характеристика методов качественного анализа производных дибензоазепина по 3-м фармакопеям

Подлинность карбамазепина по фармакопее США устанавливается:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом карбамазепина.

2. Методом ВЭЖХ. Время удержания главного пика в хроматограмме хлордиазепоксида соответствует времени удерживания РСО.

3. Реакция на хлориды. (См. «Подлинность диазепама по Международной фармакопее» №3) [13].

Подлинность карбамазепина по Британской фармакопее определяют:

1. Определением температуры плавления. Точка плавления от189 до193 °С.

2. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом карбамазепина [14].

Подлинность карбамазепина по Международной фармакопее определяют:

1. С помощью флюорометрии. Небольшое количество карбамазепина рассматривают в УФ-севете при 365 нм - имеет интенсивную синюю флуоресценцию.

2. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом карбамазепина.

3. Методом ТСХ. Растворитель – смесь этанола и хлороформа (1:1). Неподвижная фаза силикагель, подвижная – 86 объемов толуола и 14 объемов метанола, проявитель – дихромат калия. Исследуют под ультрафиолетовым светом при 365 нм сравнивая со стандартным образцом.

4. Реакция с азотной кислотой. Нагревают 0,1 г испытуемого вещества с 2 мл азотной кис­лоты на водяной бане в течение 3 мин; появ­ляется оранжево-красная окраска [15]..

2. Производные бензодиазепина

Таблица 2. Сравнительная характеристика методов качественного анализа

производных бензодиазепина по 3-м фармакопеям

Подлинность диазепама по фармакопее США устанавливается:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом диазепама или спектру сравнения диазепама. В ИК-спектре имеются полосы поглощения 1700 см^-1 – характерные для карбонильной группы; 1620 см^-1 - для азометиновой группы и 3390 и 3180 см^-1 – валентные колебания NH-групп.

2. Методом ТСХ. Растворитель – ацетон. Неподвижная фаза силикагель, подвижная – смесь ацетата этила и гептана (1:1), проявитель – серная кислота в абсолютном этаноле. Исследуют под ультрафиолетовым светом при 365 нм сравнивая со стандартным образцом [13].

Подлинность диазепама по Британской фармакопее определяют:

1. Определением температуры плавления. Точка плавления от131 до135 °С.

2. Анализом УФ-спектра диазепама в растворе серной кислоты с метанолом, который в области от 230 нм до 330 нм имеет два максимума поглощения: при 242 нм и 285 нм.

3. С помощью флюорометрии. Раствор диазепама в серной кислоте при просмотре в УФ-севете при 365 нм имеет зеленовато-желтую флуоресценцию.

4. По реакции на хлориды. 80 мг субстанции помещают в фарфоровый тигель, прибавляют 0,3 г натрия карбоната безводного и нагревают 10 мин на воздухе. После охлаждения прибавляют 5 мл азотной кислоты разведенной и фильтруют. Раствор дает реакцию на хлориды. Готовят раствор вещества, как указано в частной статье, подкисляют азотной кислотой и прибавляют раствор нитрата серебра; образуется белый творожистый осадок, растворимый в аммиаке, но практически нерастворимый в азотной кислоте [14].

Ag⁺+CI⁻→ AgCI↓

Подлинность диазепама по Международной фармакопее определяют:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом диазепама или спектру сравнения диазепама. В ИК-спектре имеются полосы поглощения 1700 см^-1 – характерные для карбонильной группы; 1620 см^-1 - для азометиновой группы и 3390 и 3180 см^-1 – валентные колебания NH-групп.

2. По УФ-спектру диазепама в растворе соляной кислоты, который в области от 230 нм до 350 нм имеет два максимума поглощения: при 241 нм и 286 нм.

3. По реакции на хлориды. Проводят сжигание, как описано в разделе «Метод сжигания в колбе с кислородом» (т.1, с.142), используя 20 мг испытуемо­го вещества и 5 мл раствора гидроокиси натрия в качестве поглощающей жидкости. Когда процесс закончен, подкисляют серной кислотой ИР и слегка кипятят в течение 2 мин; раствор дает характерные для хлоридов реак­ции, описанные в разделе «Общие испытания на подлин­ность» (т.1, с. 127).

1. Готовят раствор вещества, как указано в частной статье, подкисляют азотной кислотой и прибавляют раствор нитрата серебра; образуется белый творожистый осадок, растворимый в аммиаке, но практически нерастворимый в азотной кислоте.

Ag⁺+CI⁻→ AgCI↓

2. Смешивают вещество в количестве, указанном в част­ной статье, с равным количеством двуокиси марганца, сма­чивают серной кислотой и слегка нагревают. Выделившийся хлор обнаруживают по его зеленоватому цве­ту и по синему окрашиванию влажной крахмал-йодидной бумаги [15].

Подлинность оксазепама по фармакопее США устанавливается:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом оксазепама или спектру сравнения оксазепама. В ИК-спектре появляются интенсивные полосы поглощения при 3127 и 3125 см^-1(валентные колебания OH-, NH-групп), 1727 и 1706 см^-1 (-C=O группы), 1575 и 1490 см^-1 (C-C группы).

2. По УФ-спектру оксазепама в растворе этилового спирта, который в диапазоне 210 - 350 нм имеет два максимума, в 230 нм и 316 нм [13].

Подлинность оксазепама по Британской фармакопее устанавливают:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом оксазепама или спектру сравнения оксазепама. В ИК-спектрепоявляются интенсивные полосы поглощения при 3127 и 3125 см^-1(валентные колебания OH-, NH-групп), 1727 и 1706 см^-1 (-C=O группы), 1575 и 1490 см^-1 (C-C группы).

2. По УФ-спектру оксазепама в растворе этилового спирта, который в области от 300 нм до 350 нм имеет максимум поглощения при 316 нм.

3. Методом ТСХ. Растворитель – ацетон. Неподвижная фаза силикагель, подвижная – смесь метанола и метиленхлорида (10:100). Сушат на воздухе и исследуют под ультрафиолетовым светом при 254 нм сравнивая со стандартным образцом.

4. По реакции образования азокрасителя. При прибавлении соляной кислоты и нагревании образуется 2-амино-5-хлорбензофенон, после чего проводят реакцию образования азокрасителя на первичную ароматическую аминогруппу, добавляя соляную кислоту, нитрит натрия, сульфаминавую кислоту и нафтилэтилендиамин. Появляется фиолетово-красная окраска:

Сульфаминавую кислоту добавляют для удаления избытка нитрита натрия [14]:

NaNO₂ + HCI → HNO₂ + NaCI

HNO₂ + HSO₃NH₂ → N₂ +H₂O + H₂SO₄

Подлинность хлоридиазепоксида по фармакопее США устанавливается:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом хлоридиазепоксида или спектру сравнения хлоридиазепоксида. В ИК-спектре вещества проявляются интенсивные полосы поглощения при 3270 см^-1, характерные для валентных колебаний связи N-H; 1630 см^-1 – для связи –C=N; 1590 см^-1 и 1470 см^-1 – для ароматической группы и 1250 см^-1 – для N- оксида.

2. Методом ВЭЖХ. Падвижная фаза - готовят фильтрованную и дегазированную смесь ­метанола и воды (60:40). Неподвижная фаза- силикагель. Время удержания главного пика в хроматограмме хлордиазепоксида соответствует времени удерживания РСО.

3. По реакции образования азокрасителя. При прибавлении соляной кислоты и нагревании образуется 2-амино-5-хлорбензофенон, после чего проводят реакцию образования азокрасителя на первичную ароматическую аминогруппу, добавляя соляную кислоту, нитрит натрия, сульфаминавую кислоту и нафтилэтилендиамин. Появляется фиолетово-красная окраска:

[13].

Подлинность хлоридиазепоксида по Британской фармакопее определяют:

1. По УФ-спектру хлоридиазепоксида в растворе 0,1М соляной кислоты, который в области от 230 нм до 350 нм имеет два максимума поглощения при в 246 нм и 308 нм.

2. Реакция на хлориды. Растворяют 25 мг хлордиазепоксида гидрохлорида с 2.5 мл воды, добавьте 0.5 мл 6M аммиака, фильтруют.

1. Готовят раствор вещества, как указано в частной статье, подкисляют азотной кислотой и прибавляют раствор нитрата серебра; образуется белый творожистый осадок, растворимый в аммиаке, но практически нерастворимый в азотной кислоте.

Ag⁺+CI⁻→ AgCI↓

2. Готовят раствор вещества, как указано в частной статье добавляют 0.2 г дихромата калия и 1 мл серной кислоты. Полоску фильтровальной бумаги, смоченную 0.1 мл раствором дифенилкарбазида опускают в пробирку. Появляется фиолетово-красная окрашивание.

Подлинность нитрозепама по Британской фармакопее определяют:

1. Анализом УФ-спектра нитрозепама в растворе серной кислоты с метанолом, который в области от 230 нм до 350 нм имеет максимум поглощения при 280 нм.

2. Методом ТСХ. Растворитель – метанол. Неподвижная фаза силикагель, подвижная – смесь 10 объемов метанола и 100 объемов хлороформа, проявитель – серная кислота в абсолютном этаноле. Исследуют под ультрафиолетовым светом при 365 нм сравнивая со стандартным образцом.

3. По реакции образования азокрасителя. Появляется красное окрашивание:

4. По реакции спиртового раствора препарата с раствором гидроксида натрия. Появляется желтое окрашивание, вызванное образованием ацисоли.

5. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом нитрозепама или спектру сравнения нитрозепама [14].

Подлинность нитрозепама по международной фармакопее устанавливается:

1. Определением температуры плавления Температура плавления около

227 °С (плавится с разложе­нием).

2. С помощью УФ-спектроскопии. Проводят следующие операции при неярком свете. Готовят раствор испытуемого вещества в смеси 1 объема соляной кислоты (1 моль/л) и 9 объемов метанола с кон­центрацией 0,005 мг/мл и сразу же исследуют. Спектр погло­щения при наблюдении между 230 и 350 нм дает максимум только при длине волны около 280 им; поглощение в кювете с толщиной слоя 1 см при этой длине волны около 0,45.

3. По реакции спиртового раствора препарата с раствором гидроксида натрия. Растворяют 10 мг испытуемого вещества в 1 мл метанола, при необходимости нагревая, и добавляют 0,05 мл раствора гидроксида натрия; появляется интенсивное желтое окрашивание (Химизм реакции см. «Подлинность нитрозепама по Британской фармакопее» №4).

4. По реакции образования азокрасителя. Появляется красное окрашивание (Химизм реакции см. «Подлинность нитрозепама по Британской фармакопее» №3) [15].

Подлинность лоразепама по фармакопее США устанавливается:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом лоразепама.

2. Методом ТСХ. Растворитель –ацетон. Неподвижная фаза силикагель, подвижная – смесь хлороформа, диоксана и ледяной уксусной кислоты (91:5:4), проявители – последовательно распыляют нитрит натрия, аммония сульфат и этилендиамин гидрохлорид. Сушат. Исследуют под ультрафиолетовым светом при 254 нм сравнивая со стандартным образцом [13].

Подлинность лоразепама по Британской фармакопее определяют:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом лоразепама.

2. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр между 600 см ^-1 и 2000 см ^-1 должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом лоразепама.

3. Методом ТСХ. Растворитель –ацетон. Неподвижная фаза силикагель, подвижная – метанол, сушат на воздухе и исследуют под ультрафиолетовым светом при 254 нм сравнивая со стандартным образцом [14].

Подлинность темазепама по фармакопее США устанавливается:

1. По ИК-спектру. Инфракрасный спектр должен полностью соответствовать спектру, полученному со стандартным образцом темазепама.

2. Ультрафиолетовый спектр поглощения темазепама в метаноле показывает максимумы и минимумы в тех же самых длинах волн, что и стандартный образец.

3. Методом ВЭЖХ. Время удержания главного пика в хроматограмме хлордиазепоксида соответствует времени удерживания РСО [13].

Подлинность темазепама по Британской фармакопее определяют:

1. По УФ-спектру спиртового раствора алпразолама, который в диапазоне 210 - 400 нм имеет два максимума: в 230 нм и в 315 нм и плечо в 250 нм.

2. Методом ТСХ. Растворитель –метанол. Неподвижная фаза силикагель, подвижная – смесь 10 объемов диэтиламина и 90 объемов эфира, сушат на воздухе и исследуют под ультрафиолетовым светом при 254 нм сравнивая со стандартным образцом [14].