1. Использование осадочных реакций в клинической лаборатории.

Для определения белка в моче, для разделения альбуминов и глобулинов методом фракционного высаливания для определения уровня сахара в крови. осадочные реакции являются диагностическим приемом или служат этапом проведения диагностических работ например для количественного определения содержания белка в моче. Осаждение белков может быть обратимым и необратимым в зависимости от реактивов и условий реакции. В клинической лабораторной практике реакции осаждения используют для выделения альбуминовой и глобулиновой фракций белков плазмы крови, количественной характеристики их устойчивости в плазме, обнаружения белков в биологических жидкостях и освобождения от них с целью получения без белкового раствора. Осаждающие реактивы: трихлоруксусная к-та, азотная к-та, кофеиновый реактив, р-р спирта.

Обратимое осаждение: Под действием факторов осаждения белки выпадают в осадок, но после прекращения действия (удаления) этих факторов белки вновь переходят в растворимое состояние и приобретают свои нативные свойства. Одним из видов обратимого осаждения белков является высаливани. Насыщенным раствором сульфата аммония осаждается альбуминовая фракция белков, полунасыщенным раствором – глобулиновая фракция. Сущность реакции заключается в дегидратации молекул белка.

Необратимое осаждение белков. Необратимое осаждение белков связано с глубокими нарушениями структуры белков (вторичной и третичной) и потерей ими нативных свойств. Такие изменения белков можно вызвать кипячением, действием концентрированных растворов минеральных и органических кислот, солями тяжелых металлов.

Осаждение при кипячении.Белки являются термолабильными соединениями и при нагревании свыше 50-60 градусов С денатурируются. Сущность тепловой денатурации заключается в разрушении гидратной оболочки, разрыве стабилизирующих белковую глобулу связей и развертывании белковой молекулы. Наиболее полное и быстрое осаждение происходит в изоэлектрической точке (когда заряд молекулы равен нулю), поскольку частицы белка при этом наименее устойчивы.

Осаждение органическими кислотами.Трихлоруксусная кислота осаждает только белки, а сульфосалициловая осаждает не только белки, но и высокомолекулярные пептиды. Сульфосалициловой кислотой пользуются при определении белка в моче.

2. Молочная кислота, содержание в крови. Молочная кислота - конечный продукт анаэробного гликолиза и гликогенолиза. В норме молочной кислоты в крови содержится 0,5 – 1,5 ммоль/литр. Большая часть лактата метаболизируется печенью, являясь субстратом глюконеогенеза (кроме того, молочная кислота поглощается сердечной мышцей, где используется как энергетический материал). При физической нагрузке наблюдается лактатный ацидоз – возникает смещение рН. Причина: недостаток инсулина ингибирует пируватдегидрогеназу, катализирующую распад пировиноградной кислоты до конечных продуктов, сопровождающийся усиленным превращением пирувата в лактат.

Повышенная концентрация лактата в крови может быть обусловлена и выраженным алкалозом (метаболическим или респираторным). Предполагаемый механизм, приводящий к увеличению продукции молочной кислоты, связан с повышенной активностью рН-зависимых ферментов, катализирующих реакции гликолиза. Обычно печень оказывается способной адекватно реагировать на повышение образования лактата при алкалозе, так что уровень молочной кислоты в сыворотке крови возрастает только при тяжёлых формах алкалоза (рН сыворотки более 7,6)

3. Возрастные показатели уровня сахара в крови. Норма взрослого человека – 3,5-5,5 (6,1) ммоль/л, если больше 11 ммоль/л, то сахар появляется в моче. Если меньше 3,3 ммоль/л – гипогликемия, больше 6,1 ммоль/л – гипергликемия. Новорожденные – 2,6 – 5,0 ммоль/л, 0 - 12 месяцев – 2,7-4,44, 7 лет – 3,33-5,55.

4. Проведение теста на толерантность в глюкозе. Оценка (коэффициент Бодуена). Диагностическое значение. Толерантность – это способность усвоения. Тест на толерантность к глюкозе (ТТГ) проводится для выявления скрытого диабета. По способу введения глюкозы различают:

• пероральный (от лат. per os) (оГТТ) и

• внутривенный глюкозотолерантный тест.

Т ипы кривых концентрации глюкозы в крови при ПТТГ. Изменение концентрации глюкозы при гиперинсулинизме (1), у здоровых лиц (2), при тиреотоксикозе (3), лёгкой (4) и тяжёлой (5) форме сахарного диабета

Суть метода заключается в измерении у пациента уровня глюкозы крови натощак, затем в течение 5 минут предлагается выпить стакан теплой воды, в котором растворена глюкоза (75 грамм, у детей 1,75г. на кг. массы тела), через 2 часа вновь измеряют уровень сахара в крови.

Оценка результатов: уровень глюкозы в крови

менее 7,8 ммоль/л (через 2 часа после нагрузки глюкозой) считается нормой. При уровне более 7,8, но менее 11,0 ммоль/л результат теста расценивается как нарушение толерантности к глюкозе. При уровне глюкозы в крови более 11,0 ммоль/л результат оценивается как наличие сахарного диабета.

Коэффициент Бодуена – где А – уровень глюкозы в крови натощак; В – максимальное содержание глюкозы в крови после нагрузки глюкозой. В норме этот коэффициент составляет около 50%. Значения, превышающие 80%, свидетельствуют о серьезном нарушении обмена углеводов.

5. Основные причины гипо- и гипергликемий. В норме сахара в крови 3,5-5,5 (6,1) ммоль/л.

Гипогликемия. Гипогликемией принято считать снижение плазменной концентрации глюкозы до уровня ниже 2,2—2,8 ммоль/л. Причины:

1. Длительное голодание. У больных, получающих нормальное количество углеводов, гипогликемия может быть обусловлена нарушением глюконеогенеза.

2. Избыточное введение инсулина или избыточное выделение его при гиперфункции поджелудочной железы: снижение уровня глюкозы вследствие усиленного транспорта глюкозы внутрь клеток через активацию внутриклеточных реакций утилизации глюкозы.

3. Злоупотребление алкоголем. Алкоголь через несколько часов снижает сахар.

4. Излишняя физическая нагрузка.

5. Нарушение толерантности к глюкозе. Обусловлена двумя факторами: 1) высоким уровнем инсулина (что приводит к значительному снижению концентрации глюкозы в крови); 2) недостаточным поступлением глюкозы из кишечника (всасывание углеводов в ЖКТ к этому времени уже заканчивается).

6. Надпочечниковая недостаточность. Кортизол необходим для глюконеогенеза, поэтому и первичная, и вторичная надпочечниковая недостаточность вызывают гипогликемию голодания.

7. Антитела к инсулину. Антитела связывают большие количества эндогенного инсулина; при разрушении иммунных комплексов происходит нерегулируемый выброс инсулина. Такой вариант гипогликемии может быть следствием аутоиммунного поражения эндокринной системы у больных с диффузным токсическим зобом, ревматоидным артритом и т.п.

Гипергликемия. Гипергликемия - клинический симптом, обозначающий повышенное содержание сахара (глюкозы) в сыворотке крови. Гипергликемия появляется преимущественно при сахарном диабете или других заболеваниях эндокринной системы. Типы:

– легкая гипергликемия (уровень сахара составляет 6–8 ммоль/л);

– гипергликемия средней тяжести (8–11 ммоль/л);

– тяжелая гипергликемия (более 11,1 ммоль/л).

Причины:

1. Сахарный диабет. Вследствие инсулиновой недостаточности, инсулинзависимые ткани (печёночная, жировая и мышечная) теряют способность утилизировать глюкозу крови и, как следствие, повышается уровень глюкозы в крови, уменьшается проницаемость плазматических мембран для глюкозы, нарушается активация ферментов гликолиза, нарушение синтеза гликогена.

2. Чрезмерная активация глюконеогенеза и гликолиза глюкагоном

3. Расстройства питания. Употребление большого количества углеводов

4. Гиперсекреция соматотропного и тиреотропного гормонов (стимуляция глюконеогенеза и гликогенолиза).

5. Нарушение синтеза глюкокортикоидов: уменьшается проницаемость плазматических мембран для глюкозы и стимуляция глюконеогенеза.

6. Содержание кетоновых тел в крови. Представители кетоновых тел: бета-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты, ацетон. Они образуются в печени из АцКоА. Нормальное содержание ацетона в сыворотке крови менее 10 мг/л. В моче в норме менее 0,01 в сутки, в отдельных порциях не обнаруживаются. Суточная экскреция кетоновых тел с мочой 20-50 мг. Кетонурия – резкое увеличение содержания кетонов в моче в результате их усиленного образования и нарушения процесса окисления. Наблюдается при: сахарном диабете, голодании, кахексии, гиперинсулинизме, тиреотоксикозах, в послеоперационном периоде, гликогенозах I, II, IV типов, акромегалии, инфекционных заболеваниях, интоксикации.