11.3.1.Методика выполнения работы

Просмотреть чашки Петри, засеянные на предыдущем занятии. Подсчитать число выросших колоний.

Отобрать 2-3 изолированные колонии, описать их, зарисовать.

Изучить морфологию клеток отобранных культур, приготовив препараты "раздавленная петля".

Обратить внимание на подвижность, форму и соединение клеток бактерий .

Результаты оформить в виде таблицы.

Культуральные и морфологические особенности исследуемых бактерий.

№	Колония								МикроскопиZя
культуры	форма	размер	цвет	край	блеск	поверхность	профиль	рисунок	подвижность	клеток
1 .
2.
3 .
4 .

1. Что такое чистая культура?

2. Какими способами можно определить чистоту выделенной культуры?

3. Что такое культуральные признаки микроорганизмов?

Рекомендуемая литература

[1] c.61-75

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 12

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ.

1. Цель работы: приобретение навыков определения количества клеток микроорганизмов.

2. Общие сведения.

Число клеток в единице объема можно определить непосредственным подсчетом их под микроскопом. Для этого пользуются счетными камера­ми, капиллярами Перфильева, препаратами фиксированных и окрашенных кле­ток, приготовленных на предметных стеклах или мембранных фильтрах. Пе­речисленные методы позволяют определить общее количество клеток в еди­нице объема. Следует помнить, что подсчитываются все клетки, как жи­вые, так и мертвые.

3. Практическая часть

Метод подсчета клеток рекомендуется использовать для подсчета крупных объек­тов - дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий грибов и некоторых относительно крупных бактерий. Обычно используют камеру Горяева - Тома. Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, разделенное бороздками. На центральную часть стекла нанесена сетка. Площадь квадрата сетки указана на одной из сторон предметного стекла и соответствует 1/25 мм (большой квадрат) или 1/400 мм (малый квадрат). Часть предметного стекла, на которой нанесена сетка, на 0,1 мм ниже двух других сторон. Это глубина камеры; она всегда указывается на пред­метном стекле.

При работе с камерой необходимо соблюдать определенный порядок ее заполнения. Вначале углубление с сеткой покрывают специальным шлифо­ванным раствором покровным стеклом и, слегка прижимая, смещают покров­ное стекло в противоположные стороны для появления колец Ньютона. Это указывает на то, что покровное стекло притерто к сторонам камеры. При этом условии объем взвеси микроорганизмов, находящийся в камере, соот­ветствует расчетному. После этого камеру заполняют исследуемой суспен­зией микроорганизмов. Суспензию вносят через бороздку камеры капилляром или пипеткой. Подсчет клеток рекомендуется начинать через 5 минут пос­ле заполнения камеры, чтобы клетки осели и при микроскопировании были видны в одной плоскости.

Число клеток подсчитывается с объективом х8 или х40. Обычно подсчитывают клетки микроорганизмов в 10 больших или 20 маленьких квадратах сетки, перемещая последние по диагонали. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также клетки, пересекающие верхнюю и правую стороны квадрата. При подсчете количество клеток в большом квадрате не должно превышать 20, а в малом - 10, в противном случае исходную суспензию разводят водопроводной водой. Для получения досто­верного результата общее число подсчитанных клеток микроорганизмов должно быть не менее 600.

Точность определения зависит от того, насколько плотно пришлифо­вано покровное стекло к поверхности камеры, поэтому попечет клеток повторяют 3-4 раза, каждый раз заново монтируя камеру и заполняя ее исследуемой взвесью микроорганизмов. Это обеспечивает большую точ­ность, чем подсчет 600 клеток при однократном монтаже камеры. Коли­чество клеток в 1 мл исследуемой суспензии вычисляют по формуле:

где М – число клеток в 1 мл суспензии;

а – среднее число клеток в квадрате сетки;

h – глубина камеры в мм;

S – площадь квадрата сетки;

10 – коэффициент перевода в см мм;

n – разведение исследуемой суспензии.

Приборы, реактивы, посуда: микроскоп, счетная камера Горяева; бактериологическая петля; стерильные петли на 0,1-0,2; 1 мл, термометр, электроплита.