10.3.2. Оформление работы.

Написать отчет о проделанной работе.

10.4.Контрольные вопросы

1. Что такое ферменты?

2. Какие ферменты образуются в клетках микроорганизмов?

3. Как выявляют амилолитическую и протеолитическую активность?

4. Какие факторы влияют на ферментативную активность микроорганизмов?

Рекомендуемая литература

[1]c.7-29, [2] c.87-103

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 11

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСТОТЫ ВЫДЕЛЕННОЙ КУЛЬТУРЫ. ИЗУЧЕНИЕ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ МИКРООРГАНИЗМОВ

1. Цель работы: приобретение навыков определения чистоты выделенной культуры микроорганизмов.

2. Общие сведения.

Чистота выделенной культуры микроорганизмов должна быть тщательно проверена. Это осуществляется обычно несколькими способами – визуальным, микроскопическим контролем и высевом на ряд питательных сред. При визуальном контроле просматривается рост микроорганизмов по штриху на поверхности скошенной агаризованной среды. Если рост по штриху неоднороден, культура загрязнена. Такой контроль возможен только для культур, способных расти на поверхности плотных сред.

Чистоту культур микроорганизмов обязательно нужно контролировать под микроскопом. Для этого приготовить препарат фиксированных клеток и просмотреть его с иммерсионной системой или препарат живых клеток и просмотреть его. Чистая культура многих микроорганизмов, как правило, морфологически однородна; допустимо лишь незначительное варьирование размеров клеток. Однако необходимо помнить, что клетки некоторых бактерий, например, микробактерий, нокардий и других, полиморфные, поэтому определение чистоты таких культур при микроскопировании вызывает некоторые затруднения. Чистоту культуры микроорганизмов обязательно проверяют высевом на питательные среды. Прежде всего выделенную культуру высевают на плотную среду, благоприятную для ее роста. Однородность выросших колоний – свидетельство чистоты культуры. Обязателен посев на МПА – среду, которая обеспечивает рост многих хемогетеротрофов. Критерием чистоты культуры является однородность выросших колоний, или, напротив, отсутствие роста, если данные микроорганизмы на МПА не развиваются. Следуют иметь в виду, что заключение о чистоте некоторых культур микроорганизмов нельзя сделать только по результатам высева на МПА. Особенно это касается автотрофных микроорганизмов, а также представителей гетеротрофов, склонных с одним или несколькими спутниками. Чистоту таких культур микроорганизмов проверяют высевом еще на ряд сред – сусло, мясопептонный бульон, картофельный агар и другие. Набор сред и их состав определяются особенностями метаболизма выделенных микроорганизмов, а также их возможных спутников.

3. Практическая часть

К культуральным свойствам относятся характерные особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах.

Рост на плотных питательных средах

На поверхности плотных питательных сред микроорганизмы могут расти в виде колонии, штриха или сплошного газона. Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросшие в большинстве случаев из одной клетки. В зависимости от того, где развивались клетки (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее или на дне сосуда), различают поверхностные, глубинные и донные колонии. Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются большим разнообразием и являются наиболее существенной особенностью роста микроорганизмов на плотном субстрате. При их описании учитывают следующие признаки:

форму колонии - округлая, амебовидная, неправильная, ризоидная и другие (рис. 54);

размер (диаметр) колонии измеряют в мм; если размеры колонии не превышают 1 мм, то их называют точечными;

поверхность колонии - гладкая, шероховатая, бороздчатая, складча­тая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;

п рофиль колонии - плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и так далее (рис.55);

блеск и прозрачность - колония блестящая, матовая, тусклая, мучнистая, прозрачная;

цвет колонии - бесцветная (грязно-белые колонии относят бесцветным) или пигментированная - белая, желтая, золотистая, оранжевая, сиреневая, красная, черная. Особо выделяют выделение пигмента в субстрат ;

край колонии - ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и так далее;

структуры колонии - однородная, мелко- или крупно-зернистая, струйчатая и так далее. Край и структуру колоний определяют с помощью лупы или при мелком увеличении микроскопа. Для этого чашку помещают на столик микроскопа крышкой вниз;

к онсистенцию колонии определяют, прикасаясь к ее поверхности петлей. Колония может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, слизистый (прилипает к петле), тягучей, пленчатой (снимаются целиком), крепкой (легко ломается при прикосновении петлей).

самых разнообразных микроорганизмов имеют вид тон­ких прозрачных пленок, стелющихся по дну.

Глубинные колонии, напротив, довольно однообразны. Чаще всего они по виду похожи на более и менее сплющенные чечевички, в проекции имеющие форму овалов с заостренными концами. Лишь глубинные колонии немногих бактерий напоминают пучки ваты с нитевидными выростами в питательную- среду. Образование глубинных колоний часто сопровождается разрывом плотной среды, если развивающиеся микроорганизмы выделяют углекислоту

Рис 54 Форма колоний: а - круглая, б - круглая с фестончатым краем, в - круглая с валиком по краям, г, д - ризоидные, е - круглая с ризоидным краем, ж - амебовидная, з - нитевидная, и - складчатая, к - неправильная, л - концентрическая, м - сложная

Рис.55. Профиль колоний: а - изогнутый; б - кратерообразный; в - бугристый; г -врастающий в субстрат; д - плоский; е - выпуклый; ж - каплевидный; з - конусовидный.

Размеры и некоторые другие особенности колонии изменяются с воз­растом и зависят от состава среды, поэтому при их описании указывают возраст культуры, состав среды и температуру культивирования.

При описании роста микроорганизмов по штриху отмечают следующие особенности: скудный, умеренный или обильный; сплошной с ровным или волнистым краем; четковидный, напоминающий цепочку изолированных коло­ний; диффузный, перистый, древовидный или ризоидный. Характеризуют оп­тические свойства налета, его цвет, поверхность и консистенцию.

Рост в жидких питательных средах.

Рост микроорганизмов в жидких средах более однообразен и сопро­вождается помутнением среды, образованием пленки или осадка. Характеризуя рост в жидкой среде отличают степень помутнения - слабая, умеренная или сильная; особенности пленки - тонкая плотная или рыхлая, гладкая или складчатая, а при образовании осадка указывают - скудный он или обильный, плотный, рыхлый, слизистый или хлопьевидный.

Нередко рост микроорганизмов сопровождается появлением запаха, пигментацией среды, выделением газа. Последнее обнаруживают по образованию пены, пузырьков.

Приборы, реактивы, посуда: микроскоп; предметные и покровные стекла, бактериологическая петля, фильтровальная бумага, набор красок, раствор Люголя, иммерсионное масло.